利用弱病毒載體表達PvSR2基因降低煙草植株重金屬鎘含量的研究.pdf

1、近年來，重金屬污染成為了一個嚴重問題，土壤鎘（Cd）污染成為影響我國食品安全的重要因素之一。在農產品生產過程中控制農作物重金屬含量是治理農產品重金屬污染的重要環(huán)節(jié)。本文對國內外治理農產品重金屬污染的現狀和現有治理重金屬污染的技術進行了綜述。針對治理農產品重金屬污染難的問題，本文開展了利用弱病毒載體pCB-CMVF209-no2b表達抗重金屬基因PvSR2降低煙草植株重金屬鎘含量的研究。
　　1.含PvSR2基因的重組黃瓜花葉病毒載

2、體pCB-CMVF209-PvSR2的構建。以黃瓜花葉病毒弱毒力載體pCB-CMVF209-no2b為基礎載體，采用雙酶切連接法構建了含PvSR2基因的重組弱病毒載體pCB-CMVF209no2b-PvSR2。經PCR鑒定和測序鑒定，表明PvSR2基因載體構建成功。
　　2.表達PvSR2基因對煙草植株中重金屬鎘含量的影響研究。試驗設PvSR2、Bar1、Bar2、空載體、Mock處理，3次重復。其中采用農桿菌浸潤法對4-6葉齡的

3、本生煙苗分別接種重組弱病毒載體，接種10天后對本生煙植株土進行施鎘（鎘離子濃度：2.5mg/kg土）處理，施鎘15天后收集煙草葉樣，并采用耦合等離子體發(fā)射光譜儀進行鎘離子含量檢測。檢測結果表明，與其它處理比較，接種了含PvSR2的重組病毒載體pCB-CMVF209no2b-PvSR2的處理植株鎘含量極顯著低，是 Mock處理組鎘含量的4.42％，平均值為0.6433mg/kg；空載體處理為12.2367mg/kg；Mock處理為14.5

4、667mg/kg；Bar1處理為11.8667mg/kg；Bar2處理為11.4233mg/kg。
　　3.重組CMV病毒基因在煙草中表達情況檢測。將各處理煙草接種農桿菌液10天后采集葉樣提取總RNA，然后進行RT-PCR檢測。結果表明重組載體處理的病毒基因在煙草中都成功表達，PvSR2基因成功表達。
　　綜合分析表明，利用弱病毒載體在煙草植株中表達PvSR2基因極顯著降低了煙草植株中重金屬鎘含量，增強了植株對重金屬鎘的抗性