真菌激發(fā)子促進(jìn)蛹蟲草類胡蘿卜素生物合成的研究.pdf

1、蛹蟲草具有免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗氧化、抗衰老、降血糖、鎮(zhèn)靜、催眠和調(diào)節(jié)內(nèi)分泌系統(tǒng)等功效。新近研究表明蛹蟲草含有稀少的水溶性類胡蘿卜素，具有獨(dú)特的生理價(jià)值。因此，對(duì)其所含類胡蘿卜素的研究日益增多，但絕大部分仍處于提取、鑒定等階段，而對(duì)如何提高類胡蘿卜素的含量鮮有報(bào)道。本文通過優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)條件，添加天然激發(fā)子誘導(dǎo)等途徑提高蛹蟲草的類胡蘿卜素含量，同時(shí)對(duì)激發(fā)子促進(jìn)蛹蟲草類胡蘿卜素合成的機(jī)制進(jìn)行研究。主要結(jié)果如下：
　?。?）以蛹蟲草類

2、胡蘿卜素含量為指標(biāo)，采用單因素與正交試驗(yàn)相結(jié)合的方法優(yōu)化了蛹蟲草固體發(fā)酵的實(shí)驗(yàn)條件，得到的最佳培養(yǎng)條件為大米培養(yǎng)基30 g，營(yíng)養(yǎng)液蛋白胨濃度為1.5％，暗培養(yǎng)天數(shù)為6d，光照時(shí)間為8d。經(jīng)驗(yàn)證，在此培養(yǎng)條件下，蛹蟲草固體發(fā)酵后的類胡蘿卜素含量可達(dá)309.54μg/g。
　?。?）以粘紅酵母Rhodotorula glutinis、釀酒酵母Saccharomyces cerevisiae、紅曲霉Monascus rubber、三孢布

3、拉霉Blakeslea trispora、金針菇Flammulina velutipes5種真菌作為激發(fā)子，考察對(duì)蛹蟲草產(chǎn)類胡蘿卜素的影響，結(jié)果表明粘紅酵母在一個(gè)濃度下對(duì)蛹蟲草類胡蘿卜素含量有明顯促進(jìn)作用，提高了13.72%。其余真菌激發(fā)子對(duì)蛹蟲草均無明顯正向激發(fā)作用。
　　（3）以粘紅酵母激發(fā)子為研究對(duì)象，考察粘紅酵母培養(yǎng)時(shí)間、激發(fā)子的添加量和添加時(shí)間對(duì)蛹蟲草類胡蘿卜素含量的影響。結(jié)果表明，不同培養(yǎng)時(shí)間和激發(fā)子添加時(shí)間對(duì)類胡蘿卜

4、素的激發(fā)作用顯著，而縮小濃度范圍后，激發(fā)子濃度影響效果并不明顯。最后結(jié)果顯示84 h為粘紅酵母最優(yōu)發(fā)酵時(shí)間，比對(duì)照提高了38.19%，激發(fā)子最佳濃度為1.5 g/L，比對(duì)照提高了26.86%，最佳的添加時(shí)間5 d，比對(duì)照提高了47.44%。將粘紅酵母激發(fā)子分離為三種組分，考察各組分的添加對(duì)對(duì)蛹蟲草類胡蘿卜素含量的影響，結(jié)果表明對(duì)類胡蘿卜素有激發(fā)作用的有效組分應(yīng)為去除了蛋白質(zhì)和多糖的小分子物質(zhì)Part O。
　　（4）通過構(gòu)建蛹蟲草

5、基因組的本地blast數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)得到蛹蟲草中圓酵母素加氧酶基因carT和醛脫氫酶carD基因的DNA序列，成功克隆測(cè)序并進(jìn)行了序列的生物信息學(xué)分析。結(jié)果表明 carT基因蛋白質(zhì)在蛹蟲草和白僵菌中相當(dāng)保守，并且該蛋白質(zhì)在多種真菌中的表達(dá)都是高度同源的，表明其進(jìn)化的頻率并不高。而 carD基因在同源進(jìn)化的過程中也是相當(dāng)保守的，與白僵菌的氨基酸序列達(dá)到了百分百的同源，雖然在基因序列上有所差異，但尚不明確該差異在蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)上造成的影響。