蛇膽陳皮口服液藥效物質(zhì)組學(xué)及作用機(jī)制研究.pdf

1、目的:蛇膽陳皮口服液(Shendan Chenpi Oral Liquid，SDCP)由蛇膽汁、陳皮兩味中藥精制而成，具有順氣、止咳、化痰、平喘等功效，用于感冒、支氣管炎引起的咳喘、痰多等癥。選取SDCP作為對(duì)象，對(duì)其進(jìn)行藥效物質(zhì)組學(xué)及作用機(jī)理評(píng)價(jià)研究，從而初步闡釋有效成分的抗炎平喘作用機(jī)理，為臨床使用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:
　　1.化學(xué)物質(zhì)組學(xué)及質(zhì)量控制:采用超高效液相色譜/四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜(Ultra-perfor

2、mance liquid chromatography-quadrupole time-of-flight massspectrometry，UPLC-Q-TOF-MSE)對(duì)SDCP的化學(xué)成分進(jìn)行快速表征、鑒定，并嘗試使用其特征指紋圖譜進(jìn)行質(zhì)量控制。在此基礎(chǔ)上，以紫外色譜圖的16個(gè)共有峰建立SDCP的指紋圖譜，并對(duì)不同批次樣本進(jìn)行相似度分析。
　　2.有效性評(píng)價(jià):通過(guò)核轉(zhuǎn)錄因子(Nuclear transcription fact

3、or kappaB，NF-κB)、β2-腎上腺素受體(β2-adrenergic receptor,β2-AR)及通路雙發(fā)光報(bào)告體系和豚鼠離體平滑肌組織模型對(duì)SDCP不同劑量的藥效學(xué)進(jìn)行評(píng)價(jià)。
　　3.抗炎平喘藥效物質(zhì)篩選:建立UPLC-Q-TOF-MSE與β2-AR和NF-κB雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)相結(jié)合的方法，快速篩選潛在的SDCP中抗炎平喘活性成分，同時(shí)根據(jù)四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜數(shù)據(jù)對(duì)篩選結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定。
　　結(jié)果:

4、r>　　1.化學(xué)物質(zhì)組學(xué)及質(zhì)量控制:鑒定了25個(gè)化合物，表明了不同批次SDCP的質(zhì)量差異較小。本方法為SDCP化學(xué)成分的快速鑒定及質(zhì)量控制奠定了基礎(chǔ)。
　　2.有效性評(píng)價(jià):SDCP干預(yù)能顯著地降低腫瘤壞死因子-α(Tumor necrosisfactor-α，TNF-α)刺激人支氣管上皮細(xì)胞(Human bronchial epithelial cell，BEAS-2B)產(chǎn)生的白介素-6(Interleukin-6，IL-6)和白

5、介素-8(Interleukin-8，IL-8)的水平;通過(guò)雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)檢測(cè)，TNF-α刺激BEAS-2B可增強(qiáng)NF-κB的表達(dá)，而SDCP能顯著抑制這一作用，提示抑制NF-κB通路的激活可能是SDCP抗炎的一個(gè)主要機(jī)制。選用β2-腎上腺素受體-人胚腎細(xì)胞(β2-adrenergic receptor-293cell，β2-AR-293)，通過(guò)雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)檢測(cè)，SDCP能激活β2-AR通路;SDCP能顯著緩解乙酰膽堿

6、(Acetylcholine，Ach)誘導(dǎo)的豚鼠離體氣管平滑肌的收縮，β2-AR拮抗劑普萘洛爾(Propranolol，Pro)可以阻斷這一解痙作用。以上提示SDCP主要通過(guò)激活β2-AR通路達(dá)到平喘的效果，且均有劑量依賴(lài)性。
　　3.抗炎平喘藥效物質(zhì)篩選:SDCP中辛弗林的β2-AR激活效應(yīng)最明顯，膽酸、甘氨膽酸、?；蛆Z脫氧膽酸和?；悄懰嵋种芅F-κB激活作用最顯著，并證明雙活性評(píng)價(jià)譜效捕獲方法是篩選中藥復(fù)方有效成分的快速有力手