2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
已閱讀1頁(yè),還剩192頁(yè)未讀, 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

1、目的:參芎葡萄糖注射液臨床廣泛用于治療心腦血管疾病且療效確切,但其發(fā)揮臨床效用的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)、體內(nèi)過(guò)程及作用機(jī)制尚不明確,無(wú)法為其臨床療效提供科學(xué)依據(jù),從而限制了參芎葡萄糖注射液的產(chǎn)業(yè)化與現(xiàn)代化進(jìn)程。本研究針對(duì)貴州省名優(yōu)大品種參芎葡萄糖注射液的“藥效物質(zhì)基礎(chǔ)、質(zhì)量控制、藥代動(dòng)力學(xué)、藥物相互作用以及作用機(jī)制”等進(jìn)行系統(tǒng)的基礎(chǔ)研究,以期明確本品的藥效物質(zhì),提高產(chǎn)品質(zhì)量控制水平,并對(duì)作用機(jī)制進(jìn)行探討,為確保臨床用藥安全、有效、質(zhì)量穩(wěn)定可控提供

2、科學(xué)依據(jù)。
  方法:
  1.采用超高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)器-串聯(lián)四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜法(UHPLC-DAD-Q/TOF)對(duì)參芎葡萄糖注射液中主要化學(xué)成分進(jìn)行全面系統(tǒng)的表征;同時(shí)進(jìn)一步將心肌細(xì)胞萃取技術(shù)和超高液相色譜–電噴霧–三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC-ESI-MS/MS)分析技術(shù)相結(jié)合,對(duì)參芎葡萄糖注射液中活性成分進(jìn)行篩選;采用液相色譜建立以指紋圖譜為特征的多指標(biāo)定性定量控制方法,對(duì)多個(gè)活性成分進(jìn)行含量測(cè)定,并對(duì)藥

3、材、半成品與制劑指紋圖譜的相關(guān)性進(jìn)行考察。
  2.建立測(cè)定大鼠血漿中參芎葡萄糖注射液中主要有效成分原兒茶醛、丹參素、鹽酸川芎嗪以及迷迭香酸的UPLC-ESI-MS/MS分析方法,并分別考察丹參提取物、鹽酸川芎嗪以及參芎葡萄糖注射液在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)過(guò)程,對(duì)單方及復(fù)方的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)進(jìn)行比較。
  3.采用“cocktail探針?biāo)幬锓ā狈謩e研究參芎葡萄糖注射液對(duì)人肝微粒體和大鼠CYP1A2、CYP2D6、CYP2E1、CYP2C

4、9、CYP2C19、CYP3A4酶活性的影響;體外實(shí)驗(yàn)中,將參芎葡萄糖注射液和Cocktail探針底物在人肝微粒體中共同孵育,采用UPLC-MS/MS同時(shí)測(cè)定孵育液中混合探針?biāo)幬锎x物的濃度,并計(jì)算其IC50值,考察其對(duì)CYP450酶的抑制程度;體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,將SD大鼠分別尾靜脈注射給予參芎葡萄糖注射液與生理鹽水,連續(xù)給藥7天和14天,第8天和第15天尾靜脈注射混合探針?biāo)幬?,UPLC-MS檢測(cè)探針?biāo)幬锏难帩舛龋?jì)算其藥動(dòng)學(xué)參數(shù);從體內(nèi)外

5、角度分別考察參芎葡萄糖注射液對(duì)CYP450酶6種亞型的作用,預(yù)測(cè)發(fā)生藥物相互作用的可能性,以確保其臨床應(yīng)用的安全性與有效性。
  4.建立H9c2心肌細(xì)胞H2O2氧化損傷模型,以細(xì)胞存活率、乳酸脫氫酶(LDH)漏出量、細(xì)胞內(nèi)丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性和細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)含量作為考察指標(biāo),探討參芎葡萄糖注射液對(duì)H2O2所致心肌細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用;通過(guò)分析線粒體膜電位(△ψm)、細(xì)胞形態(tài)變化,應(yīng)用實(shí)時(shí)熒

6、光定量PCR技術(shù)(qRT-PCR)和蛋白質(zhì)印跡技術(shù)(western blotting)分析H9c2心肌細(xì)胞中Bcl-2,Bax和Caspase-3表達(dá)的情況,考察參芎葡萄糖注射液對(duì)H2O2所致H9c2心肌細(xì)胞凋亡的影響。并利用Rat Genome2302.0 Array基因芯片,考察其對(duì)H9c2心肌細(xì)胞的表達(dá)譜的影響并尋找其抗凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑,從而探究參芎葡萄糖注射液對(duì)H2O2所致心肌細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用機(jī)制。
  結(jié)果:

7、>  1.全面分析了參芎葡萄糖注射液中的化學(xué)成分,對(duì)其中13個(gè)化合物進(jìn)行了鑒定,通過(guò)心肌細(xì)胞萃取和分析技術(shù)篩選出丹參素、鹽酸川芎嗪、丹酚酸I/H、紫草酸、丹酚酸D、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸 C等8個(gè)具有心肌保護(hù)作用的丹酚酸類活性化合物;參芎葡萄糖注射液多指標(biāo)含量測(cè)定結(jié)果表明,制劑中丹參素、鹽酸川芎嗪、原兒茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸A的總量為1.295mg/mL~1.387 mg/mL,平均含量為1.336 mg/mL,RSD為1

8、.6%;各批次制劑指紋圖譜的相似度均大于0.98,且制劑與藥材、半成品的指紋圖譜有良好的相關(guān)性,實(shí)現(xiàn)了從藥材、中間體到最終產(chǎn)品的全程質(zhì)量監(jiān)控,完善了參芎葡萄糖注射液質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn),為準(zhǔn)確全面地評(píng)價(jià)參芎葡萄糖注射液的質(zhì)量提供了科學(xué)依據(jù)。
  2.以統(tǒng)計(jì)矩模型處理,丹參中各測(cè)定成分及川芎嗪的MRT有劑量依賴性,其體內(nèi)代謝存在非線性動(dòng)力學(xué)特征。且川芎嗪與丹參組成參芎方后,各藥動(dòng)學(xué)參數(shù)變化較為明顯,復(fù)方中川芎嗪AUC明顯增大,MRT、CL和

9、V顯著降低。該結(jié)果表明丹參的存在,顯著使川芎嗪在體內(nèi)的停留時(shí)間縮短而分布程度降低,提示臨床使用應(yīng)對(duì)給藥劑量及合并用藥進(jìn)行嚴(yán)格監(jiān)控以保證安全。
  3.在人肝微粒體體外孵育體系中,參芎葡萄糖注射液對(duì)CYP450酶6種亞型的IC50值均大于15%,說(shuō)明其不會(huì)產(chǎn)生競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用;大鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,咖啡因、咪達(dá)唑侖、奧美拉唑和美托洛爾連續(xù)給藥7天和14天后與空白組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;甲苯磺丁脲的重要參數(shù)AUC、MRT、T1/2、Cmax值在給

10、藥7天和14天后顯著性增大,CLz值顯著性降低。說(shuō)明參芎葡萄糖注射液對(duì)CYP2C9活性的抑制作用與給藥療程有關(guān),而對(duì)CYP1A2、CYP2D6、CYP2E1、CYP2C19和CYP3A4無(wú)影響。提示需特別注意與經(jīng)CYP2C9代謝且治療窗窄的藥物(如華法林)聯(lián)合使用,以免發(fā)生藥物相互作用導(dǎo)致不良反應(yīng)。
  4.參芎葡萄糖注射液對(duì)H2O2所致心肌細(xì)胞氧化損傷的具有保護(hù)作用,可明顯提高H2O2損傷后H9c2心肌細(xì)胞的存活率和超氧化物歧化

11、酶(SOD)活性、減少乳酸脫氫酶(LDH)漏出、降低細(xì)胞內(nèi)丙二醛(MDA)和活性氧(ROS)含量;可將H2O2損傷后的細(xì)胞回復(fù)到正常形態(tài),并抑制線粒體膜電位降低。參芎葡萄糖注射液可上調(diào)H9c2心肌細(xì)胞中抗凋亡因子Bcl-2的表達(dá),導(dǎo)致Bcl-2/Bax值升高;且明顯下調(diào)凋亡執(zhí)行效應(yīng)子Caspase-3的表達(dá),從而抑制H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡;基因芯片實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)了138個(gè)有差異表達(dá)的基因。pathway分析表明這些基因涉及了p53、Jak-S

12、TAT、mTOR和PI3K/Akt等與凋亡緊密相關(guān)的信號(hào)通路。在這些凋亡相關(guān)通路中,均有PIK3CA的參與,并且其表達(dá)差異達(dá)到了3.5倍多。PIK3CA表達(dá)的增加可上調(diào)PI3K的活性,使Akt發(fā)生磷酸化,從而激活PI3K/Akt通路,起到抗凋亡作用。這提示PI3K/Akt信號(hào)通路可能是參芎葡萄糖注射液抗H2O2誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的重要信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制。
  結(jié)論:本研究建立了基于靶細(xì)胞萃取結(jié)合UPLC/Q-TOF MS技術(shù)的中藥藥效基礎(chǔ)研究

13、方法,闡明了參芎葡萄糖注射液的藥效物質(zhì)基礎(chǔ);建立了參芎葡萄糖注射液科學(xué)的質(zhì)量控制方法,能夠確保產(chǎn)品的均一性和穩(wěn)定性,提升了產(chǎn)品的質(zhì)量控制水平;研究明確了參芎葡萄糖注射液在體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)特征,分析預(yù)測(cè)了與臨床常用藥物合用的相互作用,揭示了抗心肌氧化損傷作用及機(jī)制,為指導(dǎo)臨床合理用藥和完善藥品說(shuō)明書提供了科學(xué)依據(jù);通過(guò)上述研究,為確保參芎葡萄糖注射液臨床應(yīng)用安全、有效、質(zhì)量穩(wěn)定可控奠定了堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ),并對(duì)全面闡明“參芎葡萄糖注射液”發(fā)揮臨床

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論