桂苓神術湯利尿藥效物質基礎及作用機制初步研究.pdf

1、孟河醫(yī)派是源出江蘇常州孟河的一大地域性醫(yī)學流派，其高深的學術造詣，豐富的臨床經驗，在中醫(yī)界享有“吳中醫(yī)學甲天下，孟河名醫(yī)冠吳中”的美譽。桂苓神術湯為孟河醫(yī)派多年臨床用治療脾虛水泛證的有效方劑，該方療效確切，應用廣泛。但目前關于該方的相關藥理學研究尚未見報道，其藥效物質基礎及作用機制亦不明確。本論文以中醫(yī)藥理論為指導，按照中醫(yī)藥現(xiàn)代化的基本思路，采用現(xiàn)代藥理方法篩選了桂苓神術湯的利尿藥效部位，初步研究了其利尿作用機制；并應用現(xiàn)代分析技術對

2、桂苓神術湯藥效部位進行了成分分析，建立了藥效部位指紋圖譜并分析了與組方藥味的相關性；運用質譜學方法分析了藥效部位的主要成分，為該方更好的臨床應用和進一步開發(fā)提供基礎研究。主要研究內容和結論如下：
　　(1)采用鹽水負荷大鼠模型研究了桂苓神術湯的利尿作用并篩選了其利尿活性部位。研究結果表明，桂苓神術湯對鹽水負荷模型大鼠具有較顯著的利尿作用。陽性藥物呋塞米的利尿作用主要發(fā)生在給藥后1～2 h，而桂苓神術湯的利尿作用則緩和而持久，具體表

3、現(xiàn)在1～8 h。與苓桂術甘湯比較，桂苓神術湯的利尿作用明顯優(yōu)于苓桂術甘湯。桂苓神術湯的乙酸乙酯部位和萃余部位為其主要的利尿活性部位。
　　(2)初步研究了桂苓神術湯及利尿活性部位的利尿作用機制。采用電解質分析儀對鹽水負荷模型大鼠尿中Na+、K+、Cl-的含量進行了分析。研究結果表明，桂苓神術湯及其利尿活性部位能顯著增加大鼠尿中K+的排出量，但對Na+、Cl-無顯著影響，其利尿作用機制可能為增加大鼠尿液中K+的排泄。陽性藥物呋塞米則

4、能顯著增加大鼠尿中的Na+、K+、Cl-的排出量。與呋塞米相比，桂苓神術湯對電解質的影響相對較小。
　　(3)建立了桂苓神術湯乙酸乙酯部位的高效液相色譜指紋圖譜。最佳色譜條件為：色譜柱：Kromasil C18(4.6 mm×250 mm，5μm)，檢測波長278 nm，柱溫30℃，流速1 mL/min，流動相為乙腈-水(0.1％醋酸)，進樣量為20μL，梯度洗脫程序為0～5 min乙腈為0～5％，5～10 min乙腈為5％～11

5、％，10～40 min乙腈為11％～40％，40～45 min乙腈為40％～58％，45～60 min乙腈為58％～98％，60～65 min乙腈為98％～98％，記錄65 min。該方法準確、簡便，具有良好的重復性和穩(wěn)定性。通過對不同提取批次桂苓神術湯乙酸乙酯部位指紋圖譜研究發(fā)現(xiàn)有18個主要共有峰，與對照圖譜的相似度均大于0.90，所建立的桂苓神術湯乙酸乙酯部位指紋圖譜技術指標穩(wěn)定，重現(xiàn)性好。分析了桂苓神術湯乙酸乙酯部位與組方藥味的相

6、關性。桂苓神術湯乙酸乙酯部位HPLC指紋圖譜共有峰中，1號峰主要來源于苡仁，2、8號峰主要來源于厚樸，3號峰主要來源于白術和茅術，4、14號峰主要來源于茯苓，5、6、7號峰主要來源于砂仁，9號峰主要來源于白術，10、11號峰主要來源于桂枝，12、13、17號峰主要來源于陳皮，15號峰主要來源于半夏，16、18號峰未能歸屬。
　　(4)采用HPLC-DAD-ESI-MS對桂苓神術湯利尿活性部位--乙酸乙酯部位的主要化學成分進行了分析