麝香保心丸藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究.pdf

1、中藥是我國傳統(tǒng)文化和世界傳統(tǒng)醫(yī)學的精華，為中國乃至世界人民的健康做出了不可磨滅的貢獻。然而，由于中藥及復方中的化學成分復雜、體內(nèi)作用藥效物質(zhì)基礎(chǔ)不明確，因此對于其作用機制、體內(nèi)生物轉(zhuǎn)化及代謝過程的研究也就成了無的放矢。藥效物質(zhì)基礎(chǔ)不明確已成為嚴重制約中藥發(fā)展的“瓶頸”，不僅導致中藥及復方缺乏可靠的藥理學、毒理學研究數(shù)據(jù)，而且不能建立與國際接軌的質(zhì)量標準，最終造成我國中藥的出口率低、市場競爭力薄弱。因此中藥的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究已成為中藥現(xiàn)代

2、化研究的關(guān)鍵問題。 自上世紀80年代，日本學者田代真一提出了“血清藥理學”與“血清化學”的觀念以來，血清藥物化學的發(fā)展方興未艾。血清藥物化學認為，中藥中雖含有眾多成分，但只有被吸收入血的成分才能產(chǎn)生作用。傳統(tǒng)中藥多為口服給藥，口服給藥后藥物成分無論經(jīng)過消化道直接吸收或經(jīng)消化分解成代謝產(chǎn)物或經(jīng)肝微粒體酶代謝成有活性的代謝產(chǎn)物，其有效物質(zhì)必須以血液為介質(zhì)輸送到靶點從而產(chǎn)生作用。因而給藥后的血清才是真正起作用的“制劑”，血清中含有的成

3、分才是中藥的體內(nèi)直接作用物質(zhì)。血清藥物化學是以整體動物和復方的相互作用為研究對象，其研究思路符合中醫(yī)中藥的整體協(xié)同作用的觀點。 本論文采用血清藥物化學的分析手段研究麝香保心丸的體內(nèi)作用物質(zhì)基礎(chǔ)。HPLC-DAD-ESLD、HPLC-DAD-ESI-MS/MS以及GC-MS等多種成熟的串接技術(shù)的運用為麝香保心丸的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究提供了穩(wěn)定可靠的分析方法。 本研究首先采用LC-MS/MS及GC-MS的方法對麝香保心丸復方中所

4、含的主要化合物進行了分析，為血清藥物化學研究提供了色譜方法。由于麝香保心丸中既含有揮發(fā)性成分也含有非揮發(fā)性成分，所以本論文聯(lián)合運用HPLC-DAD-MS/MS和GC-MS技術(shù)對麝香保心丸中主要成分進行定性研究。通過對HPLC-DAD-MS/MS產(chǎn)生的數(shù)據(jù)進行分析，共鑒定了包括人參皂苷、蟾蜍甾二烯、膽酸等多類成分在內(nèi)的47個主要化合物。GC-MS產(chǎn)生的數(shù)據(jù)則通過NITS05數(shù)據(jù)庫進行檢索，共鑒定了49個揮發(fā)性小分子化合物。HPLC-DAD

5、-MS/MS和GC-MS分析條件的建立及主要化合物的分析鑒定，為下一步血清藥物化學研究奠定了基礎(chǔ)。 在已建立的HPLC-DAD-MS/MS和GC-MS分析方法的基礎(chǔ)上，本實驗通過優(yōu)化麝香保心丸的給藥劑量和血清前處理條件，建立了麝香保心丸血清藥物化學分析方法。運用HPLC-DAD-MS/MS方法對麝香保心丸提取液、給藥血清和空白血清進行對比分析，從含藥血清中共檢測到25個化學成分，鑒定了其中的17個原型入血成分及3個代謝產(chǎn)物。同時

6、，采用GC-MS方法分析對麝香保心丸提取液、給藥血清和空白血清進行對比分析，從含藥血清中共鑒定出6個原型入血成分及4個代謝產(chǎn)物。在這些入血成分中，大部分化合物都已經(jīng)證明對心血管疾病有相關(guān)的治療作用。血清藥物化學的研究基本明確了麝香保心丸的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。 本論文根據(jù)血清藥物化學的研究結(jié)果，采用HPLC/DAD/ELSD聯(lián)用技術(shù)對麝香保心丸中8個主要的原型入血成分(藥效物質(zhì)基礎(chǔ))進行了多成分定量研究。通過對多個藥效成分的同時定量研究