現(xiàn)代分析技術(shù)應(yīng)用于防風(fēng)藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究.pdf

1、中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究是實現(xiàn)中藥現(xiàn)代化的主要內(nèi)容和關(guān)鍵問題之一。本論文以防風(fēng)為研究對象，運用多種現(xiàn)代分析技術(shù)，從體外、體內(nèi)多個層次，建立了一系列中藥材藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究的方法。多成分含量測定能嚴(yán)格的控制中藥中有效成分或指標(biāo)性成分的含量，而指紋圖譜則用代表中藥物質(zhì)基礎(chǔ)的化合物群來評價中藥質(zhì)量，采用HPLC-TOF/MS等現(xiàn)代分析聯(lián)用技術(shù)對指紋圖譜中的色譜峰進(jìn)行鑒別，并對血漿、尿液中藥材的相關(guān)成分進(jìn)行鑒別，幫助我們進(jìn)行藥效物質(zhì)的篩選和機(jī)理研究。

2、中藥藥代動力學(xué)研究得到主要成分在體內(nèi)的動態(tài)變化過程，也為我們研究中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)提供了視角，為闡明中藥的組方原理、作用機(jī)制提供很好的指導(dǎo)作用。
　　 本課題采用HPLC-TOF/MS技術(shù)對防風(fēng)藥材中的化學(xué)成分進(jìn)行定性鑒別。利用飛行時間質(zhì)譜的精確分子量測定，比對化合物數(shù)據(jù)庫，共鑒別32個成分，包括8個色原酮類成分和14個香豆素類成分。將HPLC-TOF/MS技術(shù)與化學(xué)計量學(xué)方法相結(jié)合，用于鑒別與區(qū)分不同產(chǎn)地來源的防風(fēng)藥材，并找到對

3、不同類別的防風(fēng)藥材起主要分類作用的特征性成分，如5-O-甲基維斯阿米醇苷、升麻素、升麻苷、3'-O-當(dāng)歸亥茅酚、亥茅酚苷、5-O-甲基維斯阿米醇和石防風(fēng)素均為關(guān)防風(fēng)(道地防風(fēng))的標(biāo)志性成分。該法為闡明中藥材質(zhì)量差異提供了有效的方法，并為藥材的質(zhì)量控制提供參考。
　　 采用HPLC-TOF/MS技術(shù)進(jìn)一步鑒別了防風(fēng)血漿、尿液中相關(guān)成分及代謝產(chǎn)物。結(jié)果表明，防風(fēng)的主要入血成分為升麻素，而藥材中含量最高的升麻苷和5-O-甲基維斯阿米醇

4、苷入血量極微，說明單以升麻苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷為檢測標(biāo)準(zhǔn)的體外藥材質(zhì)控方法不夠合理完善，藥材中升麻素的含量亦十分重要，為探索防風(fēng)可能的藥效成分及其體內(nèi)代謝過程奠定基礎(chǔ)。
　　 根據(jù)藥材體外，體內(nèi)成分鑒別結(jié)果，建立了防風(fēng)中四種色原酮類成分升麻苷、升麻素、5-O-甲基維斯阿米醇苷和亥茅酚苷的HPLC-DAD含量測定方法，對該方法進(jìn)行了系統(tǒng)的方法學(xué)驗證，結(jié)果表明該方法可用于防風(fēng)中4個色原酮類成分的含量測定，并應(yīng)用于10批防風(fēng)藥

5、材的測定。該方法靈敏度高、穩(wěn)定性好、價格低廉、通用性強，可用于防風(fēng)的常規(guī)質(zhì)量控制，為進(jìn)一步的藥理研究及中藥藥效物質(zhì)研究提供依據(jù)。
　　 為進(jìn)一步研究防風(fēng)主要成分在體內(nèi)的吸收、代謝過程，建立了大鼠血漿中升麻苷、升麻素和5-O-甲基維斯阿米醇苷的HPLC-MS測定方法，并對其進(jìn)行藥代動力學(xué)研究。3個成分的線性范圍分別為12.99～230.5 ng·mL-1；12.81～24350 ng·mL-1；13.42～124.25 ng·mL

6、-1，其低、中、高濃度水平的絕對回收率均在94％～104％之間：精密度RSD均小于15％；穩(wěn)定性實驗結(jié)果亦符合要求。血漿中內(nèi)源性物質(zhì)均不干擾樣品峰的測定。該法簡便可靠，適合于生物樣品中三者的含量測定，并成功應(yīng)用于SD大鼠口服給藥防風(fēng)水煎液和升麻苷單體的藥代動力學(xué)研究。比較大鼠灌胃給藥防風(fēng)水煎液，升麻苷單體水溶液后升麻苷和升麻素的藥時曲線，可見大鼠灌胃給藥防風(fēng)水煎液的藥動學(xué)參數(shù)(AUC0-t,AUC0-∞和MRT)與單獨給藥升麻苷單體水溶