黃芪葛根湯的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究.pdf

1、目的：
　　闡明黃芪葛根湯抗糖尿病腎病的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，建立黃芪葛根湯譜效結(jié)合的指紋圖譜。
　　方法：
　　采用系膜細(xì)胞與巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)的Transwell模型，觀察黃芪葛根湯對AGEs誘導(dǎo)的系膜細(xì)胞炎癥的抑制作用，研究其抗炎活性。采用高效液相對黃芪葛根湯提取液進(jìn)行分析，對色譜條件（包括檢測波長、流動相、色譜柱、洗脫梯度等）進(jìn)行了優(yōu)化，建立黃芪葛根湯的指紋圖譜，并按照《中藥注射劑指紋圖譜研究的技術(shù)要求》的要求，應(yīng)用“中藥

2、色譜指紋圖譜相似性評價系統(tǒng)2004A版”對指紋圖譜進(jìn)行相似度評價以及專屬性、精密度、重復(fù)性和穩(wěn)定性等方法學(xué)考察。以大鼠腎小球系膜細(xì)胞為固相化材料，與HPLC指紋圖譜聯(lián)用，優(yōu)化實驗條件，包括樣品前處理、未結(jié)合成分的洗脫次數(shù)等，建立系膜細(xì)胞固相化模型，通過已建立的抗炎細(xì)胞模型對篩選出來的藥效物質(zhì)進(jìn)行藥效學(xué)驗證。采用HPLC指紋圖譜與ESI-MS聯(lián)用，對細(xì)胞膜固相化中的未結(jié)合成份、膜上的結(jié)合成分和細(xì)胞內(nèi)成分進(jìn)行指紋圖譜、質(zhì)譜數(shù)據(jù)的分析和鑒定，

3、解析系膜細(xì)胞相結(jié)合的藥效物質(zhì)結(jié)構(gòu)。
　　結(jié)果：
　　黃芪葛根湯高、中、低劑量組對AGEs誘導(dǎo)的系膜細(xì)胞炎癥有顯著的抑制作用，且顯示出一定的量效關(guān)系。黃芪葛根湯的指紋圖譜條件專屬性、重復(fù)性、精密度和穩(wěn)定性良好，10個批次提取液間的指紋圖譜相似度均高于0.97，均符合要求，適用于黃芪葛根湯的質(zhì)量控制。藥效學(xué)研究表明，10倍量細(xì)胞破碎液對系膜細(xì)胞炎癥模型具有顯著的抑制作用，表明采用細(xì)胞固相化可以篩選出黃芪葛根湯中具有抗炎活性的藥效