蟬翼藤抗風濕活性物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機制研究.pdf

1、蟬翼藤是我國南方地區(qū)廣泛使用的一味傳統(tǒng)植物藥，主要用于治療骨折、類風濕性關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）及各種炎癥。在漫長的使用歷史中，雖然蟬翼藤的有效性及安全性得到了充分的驗證，但現(xiàn)代研究非常匱乏。為推進該品種的現(xiàn)代化開發(fā)，獲取新型抗風濕有效藥物，對蟬翼藤抗風濕活性物質(zhì)基礎(chǔ)及相關(guān)作用機制開展研究非常必要。
　　目的:
　　在充分論證蟬翼藤抗風濕作用的有效性和可靠性的前提下，對不同極性萃取部位進行體內(nèi)

2、外抗風濕活性的篩選及驗證，并對有效部位進行成分研究，獲取潛在的活性單體化合物。利用體外細胞模型，初步闡明活性成分抗風濕作用的部分分子機制。
　　方法:
　　1.采用佐劑性關(guān)節(jié)炎(AA)小鼠模型研究蟬翼藤水提物和醇提物對實驗性關(guān)節(jié)炎的治療作用。關(guān)節(jié)炎的臨床表現(xiàn)及嚴重程度采用多種指標綜合評估，主要包括炎癥受累足足重、病理切片解剖學(xué)特征和免疫器官腫脹程度等。
　　2.蟬翼藤各萃取部位的潛在抗風濕活性通過其體內(nèi)外的抗炎、鎮(zhèn)痛及

3、免疫調(diào)節(jié)活性進行評估?？寡谆钚栽u價采用角叉菜膠誘導(dǎo)的小鼠足腫脹模型，觀察各極性部位對足腫脹度及PGE2水平的影響。鎮(zhèn)痛活性采用熱板鎮(zhèn)痛實驗考察。體內(nèi)外的免疫調(diào)節(jié)作用通過小鼠體內(nèi)的碳粒廓清實驗和小鼠脾細胞體外的轉(zhuǎn)化增殖實驗來評價。
　　3.對遴選出的潛在抗風濕活性部位的體內(nèi)活性驗證采用AA大鼠模型實驗完成，具體的治療效果通過以下指標綜合評估:關(guān)節(jié)炎指數(shù)，體重增幅，炎癥足足周，解剖變化，免疫器官腫脹度，血清和（或）肝臟中SOD、GSH

4、、OH、NO、MDA、NAG、SA、ALP、AST、ALT水平，血清中白介素-1(IL-1)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、單核細胞趨化因子-1(MCP-1)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)水平和血細胞計數(shù)結(jié)果等。
　　4.有效部位中單體的分離依靠多種色譜方法聯(lián)用完成，采用的主要色譜方法有中壓硅膠柱色譜和LH-20凝膠柱色譜法?；衔锏慕Y(jié)構(gòu)鑒定依賴多種波譜方法的綜合應(yīng)用。蟬翼藤的脂肪油和揮發(fā)性成分的構(gòu)成分析采用GC-MS法，具體的

5、化合物鑒定采取與內(nèi)建譜庫及與標準烷烴保留值對照的方法。
　　5.蟬翼藤中的代表性山酮對AA小鼠的治療作用采取與上述類似的佐劑誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎模型實驗，主要評價內(nèi)容包括臨床觀察指標和血清中的標志性酶、氧化應(yīng)急水平、組織降解物濃度、促炎細胞因子水平等。
　　6.蟬翼藤中山酮抗風濕機制研究主要通過觀察1，7-二羥基-3，4-二甲氧基山酮(X-3)對MH7A細胞的增殖和促炎細胞因子分泌的抑制作用來分析，并結(jié)合W-B法和流式細胞術(shù)分析其對可

6、能的效應(yīng)信號通路的調(diào)節(jié)與生物效應(yīng)之間的關(guān)聯(lián)性。
　　結(jié)果:
　　1.蟬翼藤的水提物和醇提物均能有效地治療AA，表現(xiàn)為各臨床觀察指標的改善和免疫器官腫脹的逆轉(zhuǎn);醇提物的療效相對于水提物更優(yōu)。
　　2.蟬翼藤的二氯甲烷萃取部位(SID)具有顯著的抗炎、鎮(zhèn)痛和免疫抑制活性，是主要的抗風濕活性部位。該極性部位對角叉菜膠導(dǎo)致的小鼠急性足腫脹表現(xiàn)出強烈的抑制作用，同時能顯著降低炎癥足中PGE2的濃度水平;延長小鼠對由熱所致疼痛的反

7、應(yīng)時間;印度墨水實驗中，觀察到對小鼠碳粒廓清率的下調(diào)作用;并對由LPS和Con A誘發(fā)小鼠脾細胞體外的轉(zhuǎn)化和增殖具有抑制作用。
　　3.SID能對AA大鼠的炎癥癥狀產(chǎn)生確切的治療作用，體重增幅減小、足腫脹、免疫器官腫大和滑膜組織增生等癥狀均得到有效控制。同時它對異常變化的血液生化指標和細胞因子水平(NO，MDA，OH·，SOD，GSH，AST，ALT，ALP，NAG，SA，IL-1，TNF-α，MCP-1和VEGF)等均產(chǎn)生了恢復(fù)

8、性調(diào)節(jié)作用。
　　4.從蟬翼藤的主要活性部位中分離并鑒定了25個化合物，其中包含12個已知山酮類化合物及1個新的山酮，另有6個化合物為首次從該植物中分離獲取。脂肪油的GC-MS譜圖中，55個信號中的34個被成功鑒定，已鑒定峰面積占總面積97.18％，主要化合物為十六烷酸(36.89％)和十八碳烯酸(31.12％)。從揮發(fā)性成分的48個信號中鑒定出29個化合物，所占總信號面積達83.71％，其中主要化合物類型為單萜(23.12％)和

9、脂肪酸(21.70％)。
　　5.所有代表性山酮對AA小鼠均具有明顯的治療作用，它們可顯著降低血清中促炎因子IL-1、TNF-α、MCP-1和VEGF的水平，并逆轉(zhuǎn)血清和肝臟中MDA、GSH、NAG和SA水平的異常變化。
　　6.X-3通過上調(diào)p38通路對MH7A細胞產(chǎn)生周期阻滯作用，進而抑制了細胞的異常增殖;通過下調(diào)JNK通路抑制了細胞促炎因子IL-1β和IL-6的分泌;通過上調(diào)NF-κB通路產(chǎn)生促凋亡作用，對細胞的增殖也

10、起到負性調(diào)節(jié)作用。
　　結(jié)論:
　　蟬翼藤具有確切的體內(nèi)抗風濕作用，其二氯甲烷部位具有良好的抗炎、鎮(zhèn)痛和免疫抑制活性，且對AA大鼠具有顯著的治療效果，是潛在的抗風濕有效部位。對該部位的分離主要獲得若干山酮類成分，鑒于其已有活性報道和其對AA小鼠產(chǎn)生的直接治療作用，該類成分被認為是蟬翼藤中發(fā)揮抗風濕作用的重要活性物質(zhì)，其對類風濕關(guān)節(jié)炎的治療作用部分地來自于對滑膜成纖維細胞的增殖和促炎因子分泌的抑制作用。在上述過程中，山酮對MA