藥對(duì)麻黃-地龍抗哮喘藥效物質(zhì)基礎(chǔ)與作用機(jī)制研究.pdf

1、為了研究藥對(duì)麻黃－地龍抗哮喘藥效物質(zhì)基礎(chǔ)與作用機(jī)制，首先對(duì)麻黃－地龍不同配比在體外模型上進(jìn)行了活性考察。 方法：觀察麻黃、地龍3種用量配比(1:1，1:3，1:9)的水煎液對(duì)10μmol/L卡巴膽堿(carbachol，CCh)、10μmol/L組胺(histamine，His)引起離體氣管平滑肌張力增加的松弛作用，以及對(duì)10μmol/LCCh引起的離體氣管上皮短路電流增加的抑制作用。 結(jié)論：麻黃、地龍藥對(duì)具有對(duì)抗CCh

2、和His引起離體氣管平滑肌收縮的作用，并有對(duì)抗CCh引起氣管上皮離子分泌的作用。1:3的配比組合是麻黃、地龍藥對(duì)的較優(yōu)組成。 對(duì)藥對(duì)單煎合用、合煎兩種配伍方式進(jìn)行了比較。 方法：測(cè)定指紋圖譜，并結(jié)合定量考察指標(biāo)化學(xué)成分。結(jié)果：兩種配伍方式所得提取液的色譜圖匹配度較高，全圖譜的相似度大于0.9，有22個(gè)共有峰，峰面積相似度＜0.9；合煎有利于麻黃生物堿溶出，單煎有利于地龍氨基酸溶出。 運(yùn)用“整體法”對(duì)麻黃-地龍藥對(duì)

3、進(jìn)行平喘活性研究，即將麻黃-地龍(質(zhì)量比1:3)單煎合用的混合水提液作為一個(gè)整體，通過(guò)AB-8大孔吸附樹(shù)脂劃分成水、50％乙醇、95％乙醇三個(gè)洗脫部位，然后對(duì)三個(gè)極性部分進(jìn)行平喘作用的考察。結(jié)果：三種極性部位均有對(duì)抗CCh和His引起的豚鼠氣管平滑肌張力增加的作用，且水洗脫部位對(duì)抗CCh引起的大鼠氣管上皮短路電流增加的作用較強(qiáng)，而含乙醇(50％乙醇和95％乙醇)洗脫部位均沒(méi)有明顯的作用。結(jié)論：藥對(duì)中不同極性大小的物質(zhì)可能通過(guò)不同的作用機(jī)

4、制都有抗哮喘效果，但綜合起來(lái)考慮，水洗脫高極性部位的平喘效果要優(yōu)于其它部位。 運(yùn)用“組合法”對(duì)麻黃-地龍藥對(duì)的平喘活性進(jìn)行研究，即分別篩選出兩個(gè)藥材的有效部位，再進(jìn)行組合部位的藥效考察。首先優(yōu)化了麻黃總生物堿的提取分離工藝，結(jié)果用酸水提取、乙酸乙酯萃取方法得到含量大于50％的麻黃總堿(M)。接著優(yōu)化了地龍的提取分離工藝，將地龍水提醇沉后的提取液通過(guò)離子交換樹(shù)脂劃分成地龍酸性部位(S)、地龍堿性部位物(J)、地龍醇沉部分(D)，在

5、解痙和抑制上皮離子分泌兩種體外模型，篩選出地龍平喘有效部位為S。體內(nèi)藥效實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步顯示S具有對(duì)抗乙酰膽堿和His混合液引起豚鼠平滑肌痙攣?zhàn)饔?，并在氨水引咳的小鼠模型上具有?zhèn)咳作用。接著試圖將S通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)一步劃分成高極性(S30)和低極性(S95)兩個(gè)部位，并用兩部位對(duì)卵蛋白誘發(fā)哮喘小鼠的抗炎和免疫調(diào)節(jié)作用進(jìn)行考察，結(jié)果在降低支氣管肺泡灌洗液(BALF)中EOS細(xì)胞數(shù)量方面，S優(yōu)于S30和S95；在降低IGE，IL-4，IL-5，

6、IL-13水平方面，S和S30、S95相比沒(méi)有顯著性差異。以上結(jié)果提示：劃段分離后并不能得到活性比劃分前更有效的部位。 篩選出地龍的有效部位后，再對(duì)M與S、J、D分別組合的組合物，以及單用M或單用S的活性進(jìn)行考察比較。體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明對(duì)于CCh和His引起的豚鼠離體氣管平滑肌收縮的舒張作用，以及CCh引起大鼠氣管黏膜短路電流上升的抑制作用，MS的組合均優(yōu)于MJ和MD組合。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步顯示MS組合對(duì)于乙酰膽堿和His混合液致

7、豚鼠哮喘的平喘作用優(yōu)于單用M；MS對(duì)于氨水引咳的小鼠鎮(zhèn)咳作用優(yōu)于單用S。以上研究結(jié)果表明麻黃與地龍組合優(yōu)于單獨(dú)使用一種，且兩種藥的最佳組合部位為MS，即麻黃總堿與地龍的酸性部位組合。可能的平喘作用機(jī)制為解痙、抑制上皮離子分泌以及鎮(zhèn)咳作用。 對(duì)于麻黃和地龍的有效部位中的化學(xué)成分進(jìn)行了測(cè)定。利用酸性染料比色法測(cè)定了麻黃總堿中生物堿含量大于80％；用HPLC法測(cè)定了其中2個(gè)主要成分麻黃堿和偽麻黃堿的含量，在總堿中占80％。用茚三酮比色