蒙藥漏蘆花抗甲型流感病毒藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)理研究.pdf

1、目的:篩選蒙藥漏蘆花抗甲型流感H1N1病毒活性成分及作用機(jī)理研究。方法:①運(yùn)用SPR-BIAcore技術(shù)，篩選蒙藥漏蘆花抗甲型流感有效部位。②利用酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)(ELISA)測試技術(shù)對篩選到的漏蘆花有效部位進(jìn)行細(xì)胞水平藥效學(xué)研究。③Macsynergy軟件與酶聯(lián)免疫ELISA法結(jié)合檢測漏蘆花與已上市的達(dá)菲的聯(lián)合應(yīng)用的協(xié)同作用。④運(yùn)用傳統(tǒng)硅膠、凝膠等柱層析法對漏蘆花有效部位進(jìn)一步分離提取抗H1N1病毒的活性成分。⑤利用神經(jīng)氨酸酶和SPR-B

2、IAcore技術(shù)對漏蘆花的作用機(jī)理進(jìn)行研究。結(jié)果:利用SPR-BIAcore技術(shù)篩選到漏蘆花的乙酸乙酯部位對甲型流感病毒具有很好的抑制率，結(jié)果顯示:漏蘆花乙酸乙酯提取物與H1N1的膜蛋白(HA)、結(jié)合值500μg/mL時(shí)700.7RU、核蛋白NP結(jié)合值為100μg/mL時(shí)161RU，利用體外ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明漏蘆花乙酸乙酯部位對甲型流感H1N1病毒有很好的活性，其IC50可以達(dá)到330.09μM.漏蘆花乙酸乙酯部位的抑制率為:64.

3、59％。利用Macsynergy軟件實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，漏蘆花與已上市的達(dá)菲具有高度協(xié)同作用，協(xié)同值為125.2(1)nM2％。用傳統(tǒng)的硅膠、凝膠等柱層析法對漏蘆花乙酸乙酯部位提取分離得到5個(gè)單體，并得到具有抗H1N1有效的活性單體LLH-2，單體抗H1N1病毒抑制率為70.59％。神經(jīng)氨酸酶實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)漏蘆花具有抑制神經(jīng)氨酸酶的作用，抑制率為50.48％、達(dá)菲抑制率51.41％。結(jié)論:漏蘆花乙酸乙酯具有抗甲型流感病毒H1N1活性，漏蘆花乙酸