當(dāng)歸多糖口服液的制備和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及其藥效學(xué)評價.pdf

1、當(dāng)歸是一味補血活血傳統(tǒng)中藥，其有效成分為當(dāng)歸多糖。有研究表明，當(dāng)歸多糖對腫瘤、感染、貧血、糖尿病等具有一定的療效。采用傳統(tǒng)工藝經(jīng)提取、分離、純化的當(dāng)歸多糖由于提取產(chǎn)率低且成本高，無法大批量生產(chǎn)，不利于制成產(chǎn)品進入臨床。本文擬采用新型澄清劑工藝提取道地藥材“岷縣當(dāng)歸”中的當(dāng)歸多糖制備當(dāng)歸多糖口服液，并對其進行質(zhì)量控制和藥效學(xué)評價，為當(dāng)歸多糖制劑的放大生產(chǎn)和進入臨床實驗奠定一定的理論及物質(zhì)基礎(chǔ)。
　　傳統(tǒng)當(dāng)歸多糖提取方法包括以下幾個步

2、驟，依次為：醇浸、水提、pH調(diào)節(jié)、醇沉等步驟。所得的當(dāng)歸粗多糖糖含量為40％左右，產(chǎn)率約為2%。該法所得粗多糖制成口服液口感差，且極易出現(xiàn)沉淀。
　　本課題采用澄清劑工藝得到當(dāng)歸粗多糖，并測定其產(chǎn)率和糖含量。對口服液制備工藝進行優(yōu)化后得到了符合藥典相關(guān)規(guī)定的當(dāng)歸多糖口服液，并制定其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。通過建立小鼠骨髓抑制模型，以傳統(tǒng)水提醇沉工藝制備的當(dāng)歸多糖水提液為對照考察其藥效學(xué)。
　　第一部分當(dāng)歸多糖提取工藝的改進
　　以甘

3、肅岷縣當(dāng)歸作為原材料，采用澄清劑工藝代替?zhèn)鹘y(tǒng)水體醇沉法得到當(dāng)歸粗多糖，并測定其產(chǎn)率和糖含量。對工藝中澄清劑用量、醇沉體積和水提液濃度三個影響當(dāng)歸粗多糖品質(zhì)的因素進行優(yōu)化，得到最佳的當(dāng)歸粗多糖提取工藝。
　　澄清劑工藝提取當(dāng)歸粗多糖的主要工藝流程為：醇浸、水提、加入澄清劑、濃縮、醇沉。最佳的當(dāng)歸粗多糖提取工藝為：澄清劑用量為當(dāng)歸多糖飲片重量的1%、乙醇加入量為原有溶液體積的1倍、水提液體積為10倍當(dāng)歸飲片投入量。澄清工藝所得當(dāng)歸粗多

4、糖產(chǎn)率為2.5%，糖含量大于50%。該制備方法滿足實驗室制備當(dāng)歸多糖口服液的要求。
　　第二部分當(dāng)歸多糖口服液的制備
　　在澄清劑工藝提取當(dāng)歸粗多糖的基礎(chǔ)上，分別考察制備方法、添加劑的種類及用量和滅菌方法對當(dāng)歸多糖口服液制備的影響。當(dāng)歸多糖口服液制備方法中考察了粉末溶解和直接濃縮兩種方法；添加劑分別考察了羧甲基纖維素鈉和吐溫80及其用量；滅菌方法采用高溫高壓滅菌和巴氏滅菌對當(dāng)歸多糖口服液細菌的抑制作用進行比較。
　　實

5、驗結(jié)果表明，當(dāng)歸多糖口服液的最佳的制備工藝為直接濃縮、不加入添加劑并采用巴氏滅菌法滅菌。該法制備的當(dāng)歸多糖口服液符合藥典關(guān)于口服液的相關(guān)規(guī)定。
　　第三部分當(dāng)歸多糖口服液的性狀及穩(wěn)定性考察
　　對上述澄清劑制備工藝所得的當(dāng)歸多糖口服液進行性狀和穩(wěn)定性考察。通過對口服液的密度和pH進行測定，考察口服液的性狀。采用苯酚—硫酸法測定當(dāng)歸多糖口服液的主藥及含量。當(dāng)歸多糖口服液于-20℃、4℃、25℃、40℃、60℃放置一個月，考察其

6、穩(wěn)定性。
　　結(jié)果表明，澄清劑工藝所得的口服液pH為5.1-5.2，密度為1.1-1.2mg/mL，糖濃度大于200mg/mL，且干燥后多糖含量大于50%。當(dāng)歸多糖口服液在-20℃、4℃和25℃放置一個月無明顯性狀改變；在40℃和60℃放置一個月性狀有顯著改變。澄清劑工藝可制備出性狀穩(wěn)定的當(dāng)歸多糖口服液；當(dāng)歸多糖口服液不宜儲存于高溫條件。
　　第四部分當(dāng)歸多糖口服液的藥效學(xué)評價
　　急性毒性實驗中，健康小鼠灌胃當(dāng)歸多糖

7、口服液2000mg/kg(qd×7)，灌胃結(jié)束后觀察7天。小鼠死亡率為20%，當(dāng)歸多糖口服液LD50>2000mg/kg。表明當(dāng)歸多糖口服液為低毒制劑。
　　采用環(huán)磷酰胺建立骨髓抑制小鼠模型，以水提醇沉法制備的當(dāng)歸多糖水溶液為對照，對澄清劑工藝制備的當(dāng)歸多糖口服液進行藥效學(xué)評價。小鼠灌胃分別給予治療藥物當(dāng)歸多糖水溶液和口服液(qd×10)，并于實驗最后3天腹腔注射環(huán)磷酰胺(qd×3)。與陰性組相比，當(dāng)歸多糖水溶液和口服液均能夠緩解

8、骨髓抑制小鼠的體重和脾指數(shù)下降。陰性組、實驗組和陽性組小鼠體重變化率分別為0.0302、0.2462和0.2087，脾指數(shù)分別為0.0090、0.0111和0.0093。當(dāng)歸多糖水溶液和口服液對骨髓抑制所致的白細胞下降均無明顯改善作用。值得注意的是，傳統(tǒng)水提醇沉工藝制備的當(dāng)歸多糖水溶液和采用澄清劑工藝制備的當(dāng)歸多糖口服液還可降低骨髓抑制小鼠外周血中的單核細胞和粒細胞，同時升高淋巴細胞百分比。與陰性組相比，實驗組和陽性組的淋巴細胞百分比分

9、別升高了6.8%和6.2%，單核細胞計數(shù)分別降低了0.042×109/L和0.074×109/L，粒細胞計數(shù)分別降低了0.36×109/L和0.31×109/L。結(jié)果表明，當(dāng)歸多糖水溶液和口服液均能促進外周血白細胞發(fā)揮免疫作用，能在一定程度上緩解小鼠的骨髓抑制。采用澄清劑工藝制備的當(dāng)歸多糖口服液組和傳統(tǒng)水提醇沉工藝制備的當(dāng)歸多糖水溶液組在緩解骨髓抑制上沒有顯著性差異。
　　綜上，采用澄清劑工藝制備當(dāng)歸多糖口服液是一種高效環(huán)保的制備