象耳豆根結(jié)線蟲MeCPI基因的分離與鑒定.pdf

1、象耳豆根結(jié)線蟲（Meloidogyne enterolobii）寄主范圍廣，繁殖率高，致病力強(qiáng)，可寄生攜帶Mi抗性基因的番茄（Solanum lycopersicum）和辣椒（Capsicum frutescens）。如今，象耳豆根結(jié)已成為全球熱帶、亞熱帶地區(qū)作物的一個(gè)重要病原物。該線蟲在我國(guó)南方地區(qū)分布較廣，且嚴(yán)重危害多種作物，目前已在20多種經(jīng)濟(jì)作物及多種熱帶水果上分離到該線蟲。象耳豆根結(jié)線蟲在其寄生過(guò)程中，向寄主植物細(xì)胞中分泌多種

2、由線蟲食道腺細(xì)胞表達(dá)的效應(yīng)子蛋白，分離和鑒定這些效應(yīng)子蛋白的功能有助于理解象耳豆根結(jié)線蟲的分子致病機(jī)理。本文通過(guò)同源克隆的方法，克隆到象耳豆根結(jié)線蟲的一個(gè)半胱氨酸蛋白酶抑制劑基因MeCPI，并通過(guò)原位雜交、齡期表達(dá)、體外RNAi和瞬時(shí)表達(dá)等方法，初步分析了MeCPI的功能。
　　1.經(jīng)同源克隆得到了象耳豆根結(jié)線蟲的MeCPI基因。該基因的cDNA全長(zhǎng)為444bp，DNA全長(zhǎng)為1543bp，含有4個(gè)內(nèi)含子。MeCPI基因編碼的蛋白質(zhì)

3、含有147個(gè)氨基酸殘基，用 SignalP預(yù)測(cè)該蛋白含有信號(hào)肽序列。該蛋白含有一個(gè)半胱氨酸蛋白酶抑制劑蛋白保守結(jié)構(gòu)域。
　　2.通過(guò)原位雜交的技術(shù)，研究了 MeCPI基因在象耳豆根結(jié)線蟲侵染前二齡幼蟲中的定位。結(jié)果顯示，該基因在象耳豆根結(jié)線蟲的背食道腺部位表達(dá)。
　　3. qRT-PCR結(jié)果表明，MeCPI基因在四齡幼蟲階段表達(dá)量最高，在三齡幼蟲階段也有較高的表達(dá)量，而在卵和侵染前二齡幼蟲階段表達(dá)量非常低。表明 MeCPI基