辣椒根結線蟲抗性基因Mel精細定位.pdf

1、根結線蟲病是危害辣椒正常生長、造成減產(chǎn)的主要病害。培育抗病品種是防治根結線蟲的有效方法。常規(guī)育種周期長，分子標記輔助選擇可以加快育種進程。目前，已經(jīng)報道的辣椒抗根結線蟲基因至少有9個，其中，Me1基因是持久和廣譜抗性的，已知其位于第9號染色體。本文以辣椒抗病品種DH330（Me1）和感病品種0516及其構建的BC1群體為試驗材料，對Me1進行精細定位，分析注釋基因，為克隆該基因、研究其抗病機理以及利用分子標記輔助選擇(MAS)的方法培育

2、抗線蟲新品種奠定基礎。主要研究結果如下:
　　1.采用南方根結線蟲(M incognita)對BC1群體1583個單株進行抗性鑒定，抗感株數(shù)比1.04∶1，符合顯性基因1∶1理論分離比(x2=0.495＜3.84)。
　　2.比較根結線蟲抗性基因定位遺傳圖譜和CM334基因組物理圖譜，選擇了77對KASPar引物進行篩選，4對在群體間有多態(tài)性;連鎖分析表明標記K77和K32與Me1連鎖最緊密，遺傳圖距分別是7.68 cM和1

3、9.04 cM，實現(xiàn)對Me1的初步定位。
　　3.利用CM334和Zunla基因組序列，運用SSRHunter軟件查找位于標記K77和K32之間的簡單重復序列。在兩基因組中，二核苷酸AT/TA出現(xiàn)頻率分別為28.5％和81.1％，三核苷酸AAC/CCA/TGT/TTG出現(xiàn)頻率分別為19.0％和44.7％。共開發(fā)233個SSR標記，其中6對在群體中表現(xiàn)多態(tài)性。與BC1群體抗性鑒定的表型結合，將目標基因定位在SSR標記24-20和ZY

4、6-13之間210Kb區(qū)間內(物理區(qū)間250.08～250.29Mb)，遺傳距離分別為1.83和0.75cM。
　　4.利用生物信息學獲得定位區(qū)間內CM334基因組的基因注釋。根據(jù)序列信息通過片段擴增和測序，找到親本間的差異片段及位點，設計標記，將Me1定位在標記16880-1和16830-H之間。兩標記與Me1的遺傳距離分別為1.44cM和0.63 cM。參考CM334基因組信息，物理圖距130 Kb內有4個注釋基因，下一步研究