利用brainbow研究神經根損傷后短固有束重塑及Foxp1基因的表達.pdf

1、背景和目的:
　　 脊髓及脊神經根損傷常常導致嚴重的功能障礙，其中有些不完全損傷能夠被軸突重塑部分代償。例如，70％C5神經根損傷可自行恢復。目前的證據(jù)表明，皮質脊髓束對前角運動神經元的調節(jié)作用有限，不同脊髓節(jié)段間通過緊貼灰質周圍的短固有束相互協(xié)調作用完成精細的神經肌肉調節(jié)過程。這些神經束的形成及精確調控的過程還沒有完全被了解。本課題研究通過建立brainbow1.0-Cre-ERTM小鼠單側T1脊神經根損傷模型，分別在損傷前，

2、及損傷后12周內，利用激光共聚焦顯微鏡技術觀察短固有束重塑過程，并通過蛋白質印跡法(western blot)判斷Foxp1基因的表達，從而研究神經根損傷后短固有束重塑和Foxp1基因可能在重塑中的的作用，為神經根的損傷修復機制和短固有束的重塑提供形態(tài)學依據(jù)和理論支持。探討該過程有利于今后研究相關癱瘓的治療。
　　 方法:
　　 通過向Jackson實驗室購買B6.Cg-Tg(Thy-brainbow1.0)HLich/

3、J小鼠和B6.Cg-Tg(UBC-cre/ERT2)1Ejb/J小鼠，鑒定基因型后交配篩選出F1代小鼠。對F1代小鼠腹腔注射濃度為20mg/ml的他莫昔芬玉米油溶液100μl進行誘導，每天一次，連續(xù)5天。誘導完成后一周，經熒光篩選出brainbow1.0-Cre-ERTM目標小鼠14只，隨機分為7組;實驗組1-6（T1神經根損傷后1周、2周、4周、6周、8周、12周）及對照組。實驗組小鼠構建T1神經根損傷模型，對照組小鼠僅作后路減壓，不

4、損傷T1神經根。取制作厚度為12.5μm的矢狀位和橫截面脊髓冰凍切片。利用激光共聚焦顯微鏡技術和western blot觀察實驗組和對照組C7-T3脊髓節(jié)段短固有束所在區(qū)短固有束纖維的數(shù)量變化及Foxp1基因的表達水平。
　　 結果:
　　 對照組小鼠（T1神經根未損傷），C7-T3脊髓節(jié)段短固有束所在區(qū)短固有束纖維的數(shù)量很少且很少量Foxp1基因的表達。實驗組1（T1神經根損傷后1周）傷側C7-T3脊髓節(jié)段短固有束所在

5、區(qū)短固有束纖維的數(shù)量、Foxp1基因的表達量開始增加;實驗組2、3（T1神經根損傷后2周、4周）傷側C7-T3脊髓節(jié)段短固有束所在區(qū)短固有束纖維的數(shù)量、Foxp1基因的表達量明顯增加，且增加較實驗組1（損傷后1周）明顯;實驗組4、5、6（T1神經根損傷后6周、8周、12周）傷側C7-T3脊髓節(jié)段短固有束所在區(qū)短固有束纖維的數(shù)量、Foxp1基因的表達量增加，較實驗組2、3（損傷后2周、4周）短固有束纖維的數(shù)量相對減少、Foxp1基因的表達

6、量對應降低，但實驗組4、5、6之間短固有束纖維數(shù)量及Foxp1基因的表達相對穩(wěn)定。
　　 結論:
　　 (1)通過利用激光共聚焦顯微鏡觀察brainbow1.0-Cre-ERTM小鼠T1神經根損傷后1周、2周、4周、6周、8周、12周C7-T3脊髓節(jié)段短固有束所在區(qū)域短固有束顯示:神經根損傷后，短固有束重塑分為三個階段。第一階段是短固有束纖維生長起始階段，為損傷后1周;第二階段短固有束纖維生長階段，為損傷后2至4周，此階