初步探索Foxp1及Ctgf在糖代謝調(diào)節(jié)中的作用.pdf

1、第一部分初步探索Foxp1在糖代謝調(diào)節(jié)中的作用
　　 長期的進化使得機體能夠通過復(fù)雜的機制使血糖保持在一個相對穩(wěn)定的范圍內(nèi)。這些機制包括肝臟通過糖原分解和糖異生產(chǎn)生葡萄糖，外周組織如骨骼肌、脂肪組織和內(nèi)臟器官如肝臟清除葡萄糖。肝臟在生成和利用葡萄糖過程中起了重要的作用。過氧化物酶體增殖受體γ，共激活因子1α(PGC1α)是糖異生酶基因的上游調(diào)控因子，對于一些酶表達的激活發(fā)揮重要的調(diào)控功能。在糖尿病情況下糖異生過程被非正常開啟。F

2、oxp1全稱：forehead box p1屬于Fox家族，是一種轉(zhuǎn)錄因子。Foxp1有一個翼狀螺旋的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域和一個同源的依賴DNA結(jié)合的N末端轉(zhuǎn)錄抑制結(jié)構(gòu)域。該基因的功能廣泛，在心臟和肺的發(fā)育，B細胞的發(fā)育和巨噬細胞的分化中起到重要的作用，并且與惡性腫瘤發(fā)生有關(guān)。通過芯片分析發(fā)現(xiàn)Foxp1在不同的營養(yǎng)條件下以及在ob/ob，db/db小鼠中表達量都有明顯的變化，于是推測該基因可能參與代謝過程。通過體內(nèi)和體外實驗，我們證明了Fo

3、xp1能夠調(diào)節(jié)PGC1α、PEPCK、G6PC和GCK的表達。在小鼠肝臟原代細胞中，增加Foxp1的表達量，能夠有效提高細胞對胰島素的敏感性，對糖尿病造成的高血糖可能具有改善效果。本實驗首次證明了Foxp1在機體糖代謝中發(fā)揮功能，或許為以后糖尿病的治療提供線索。
　　 第二部分初步探Ctgf在糖代謝調(diào)節(jié)中的作用
　　 蛋白連接組織生長因子(CTGF)，又稱之為CCN2，是一個36到38kDa富含絲氨酸的肝素結(jié)合蛋白，一個

4、高度保守CCN立早反應(yīng)家族的一個成員。Ctgf基因過表達腺病毒構(gòu)建及鑒定，初步探究Ctgf在糖脂代謝方面的功能?？寺tgf過表達質(zhì)粒，定向克隆入穿梭載體pAdTrack-CMV，PmeⅠ酶切線性化穿梭質(zhì)粒轉(zhuǎn)化改造的EcoliBJ5183(含腺病毒載體pAdEasy-1)感受態(tài)細菌產(chǎn)生重組腺病毒載體，用PacⅠ線性化重組質(zhì)粒，回收轉(zhuǎn)染293A細胞包裝病毒顆粒，經(jīng)過三輪擴增，感染肝原代細胞，觀察感染效率及檢測基因表達情況。通過對小鼠不同時

5、間段的饑餓處理，提取肝臟RNA做RT-PCR，實時定量PCR來檢測Ctgf基因在不同的營養(yǎng)條件下的變化情況。成功包裝Ctgf的腺病毒，感染效率達到90％以上。Ctgf在不同的營養(yǎng)條件下，表達情況不同并且與糖脂代謝重要基因PGC1α表達情況一致。過氧化物酶體增殖受體y共激活因子1(PGC1α)是糖異生酶基因的上游調(diào)控因子，對于一些酶表達的激活發(fā)揮重要的調(diào)控功能。在糖尿病情況下糖異生過程被非正常開啟。饑餓24h，Ctgf上調(diào)3．38+0．5