初步探索Foxp1及Ctgf在糖代謝調(diào)節(jié)中的作用.pdf

1、第一部分初步探索Foxp1在糖代謝調(diào)節(jié)中的作用
　　 長(zhǎng)期的進(jìn)化使得機(jī)體能夠通過(guò)復(fù)雜的機(jī)制使血糖保持在一個(gè)相對(duì)穩(wěn)定的范圍內(nèi)。這些機(jī)制包括肝臟通過(guò)糖原分解和糖異生產(chǎn)生葡萄糖，外周組織如骨骼肌、脂肪組織和內(nèi)臟器官如肝臟清除葡萄糖。肝臟在生成和利用葡萄糖過(guò)程中起了重要的作用。過(guò)氧化物酶體增殖受體γ，共激活因子1α(PGC1α)是糖異生酶基因的上游調(diào)控因子，對(duì)于一些酶表達(dá)的激活發(fā)揮重要的調(diào)控功能。在糖尿病情況下糖異生過(guò)程被非正常開(kāi)啟。F

2、oxp1全稱(chēng)：forehead box p1屬于Fox家族，是一種轉(zhuǎn)錄因子。Foxp1有一個(gè)翼狀螺旋的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域和一個(gè)同源的依賴(lài)DNA結(jié)合的N末端轉(zhuǎn)錄抑制結(jié)構(gòu)域。該基因的功能廣泛，在心臟和肺的發(fā)育，B細(xì)胞的發(fā)育和巨噬細(xì)胞的分化中起到重要的作用，并且與惡性腫瘤發(fā)生有關(guān)。通過(guò)芯片分析發(fā)現(xiàn)Foxp1在不同的營(yíng)養(yǎng)條件下以及在ob/ob，db/db小鼠中表達(dá)量都有明顯的變化，于是推測(cè)該基因可能參與代謝過(guò)程。通過(guò)體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)，我們證明了Fo

3、xp1能夠調(diào)節(jié)PGC1α、PEPCK、G6PC和GCK的表達(dá)。在小鼠肝臟原代細(xì)胞中，增加Foxp1的表達(dá)量，能夠有效提高細(xì)胞對(duì)胰島素的敏感性，對(duì)糖尿病造成的高血糖可能具有改善效果。本實(shí)驗(yàn)首次證明了Foxp1在機(jī)體糖代謝中發(fā)揮功能，或許為以后糖尿病的治療提供線索。
　　 第二部分初步探Ctgf在糖代謝調(diào)節(jié)中的作用
　　 蛋白連接組織生長(zhǎng)因子(CTGF)，又稱(chēng)之為CCN2，是一個(gè)36到38kDa富含絲氨酸的肝素結(jié)合蛋白，一個(gè)

4、高度保守CCN立早反應(yīng)家族的一個(gè)成員。Ctgf基因過(guò)表達(dá)腺病毒構(gòu)建及鑒定，初步探究Ctgf在糖脂代謝方面的功能。克隆Ctgf過(guò)表達(dá)質(zhì)粒，定向克隆入穿梭載體pAdTrack-CMV，PmeⅠ酶切線性化穿梭質(zhì)粒轉(zhuǎn)化改造的EcoliBJ5183(含腺病毒載體pAdEasy-1)感受態(tài)細(xì)菌產(chǎn)生重組腺病毒載體，用PacⅠ線性化重組質(zhì)粒，回收轉(zhuǎn)染293A細(xì)胞包裝病毒顆粒，經(jīng)過(guò)三輪擴(kuò)增，感染肝原代細(xì)胞，觀察感染效率及檢測(cè)基因表達(dá)情況。通過(guò)對(duì)小鼠不同時(shí)

5、間段的饑餓處理，提取肝臟RNA做RT-PCR，實(shí)時(shí)定量PCR來(lái)檢測(cè)Ctgf基因在不同的營(yíng)養(yǎng)條件下的變化情況。成功包裝Ctgf的腺病毒，感染效率達(dá)到90％以上。Ctgf在不同的營(yíng)養(yǎng)條件下，表達(dá)情況不同并且與糖脂代謝重要基因PGC1α表達(dá)情況一致。過(guò)氧化物酶體增殖受體y共激活因子1(PGC1α)是糖異生酶基因的上游調(diào)控因子，對(duì)于一些酶表達(dá)的激活發(fā)揮重要的調(diào)控功能。在糖尿病情況下糖異生過(guò)程被非正常開(kāi)啟。饑餓24h，Ctgf上調(diào)3．38+0．5