PTP1B在RYGB手術(shù)改善肥胖癥大鼠肝臟糖代謝中的作用及機制探討.pdf

1、目的：研究 Roux-en-Y胃轉(zhuǎn)流術(shù)（Roux-en-Y gastric bypass，RYGB）對肥胖癥大鼠肝臟蛋白酪氨酸磷酸酶1B（Protein tyrosine phosphatase，PTP1B）的表達影響，初步探索RYGB術(shù)后PTP1B與肥胖癥大鼠肝臟糖代謝改善的關(guān)系，為RYGB胃轉(zhuǎn)流手術(shù)防治肥胖及相關(guān)糖代謝紊亂的作用及可能機制提供理論依據(jù)。
　　方法：
　?。?）4周齡雄性SD大鼠共70只，隨機抽取60只采用

2、高脂飼料喂養(yǎng)，建立肥胖癥大鼠模型；余10只大鼠采用普通飼料喂養(yǎng)，作為正常對照組，分籠飼養(yǎng)12周，每周固定時間測定各組大鼠體質(zhì)量。（2）高脂誘導(dǎo)12周后，肥胖造模成功大鼠共計28只，按干預(yù)方式不同將肥胖大鼠分為肥胖組（Ob組，n=8）、RYGB手術(shù)組（Ob+RYGB組，n=12）和假手術(shù)組（Ob+Sham組，n=8）。（3）術(shù)后每周固定時間監(jiān)測各組體質(zhì)量及餐后血糖值；術(shù)前、術(shù)后第4周、第5周及術(shù)后第6周分別檢測各組大鼠糖耐量、丙酮酸耐量及

3、胰島素耐量情況；術(shù)后第8周檢測各組空腹血糖水平，DEXA檢測脂肪比率；ELISA檢測各組空腹血漿胰島素及GLP-1；測定各組大鼠術(shù)后第8周ALT、AST、TC、TG、HFD-c、LFD-c、HOMA-IR等指標(biāo)。（4）術(shù)后8周收取各組肝臟組織標(biāo)本，HE組織學(xué)染色觀察肝細胞改變情況；PAS染色檢測肝臟組織糖原沉積情況，熒光定量RT-PCR檢測各組大鼠肝組織葡萄糖6磷酸酶（Glucose-6-phosphatase，G6Pase）、磷酸烯醇

4、丙酮酸羧激酶（Phosphoenolpyruvate carboxykinase，PEPCK）、糖原合成酶激酶-3β（Glycogen synthase kinase-3β,Gsk-3β）和糖原合成酶（Glycogen synthase,Gs）mRNA情況；Western blot檢測各組大鼠肝臟組織中糖代謝相關(guān)關(guān)鍵因子：胰島素受體底物-1(Insulin receptor substrate-1,IRS1)、蛋白激酶B(Protein

5、 kinase B,Akt)、叉頭轉(zhuǎn)錄因子1（Forkhead box O1，F(xiàn)oxO1）、PTP1B蛋白及磷酸化水平；免疫組化檢測PTP1B的表達及分布情況。
　　結(jié)果：
　　1.術(shù)前及術(shù)后體質(zhì)量變化比較
　　4周齡SD大鼠起點體質(zhì)量比較無差異(P＞0.05)；造模第4周、第8周、第12周高脂組大鼠體質(zhì)量較正常組顯著增加(P<0.05)。
　　術(shù)后第2周、4周、6周、8周，Ob+RYGB組大鼠體質(zhì)量較Ob組及O

6、b+Sham組明顯降低(P<0.05)。術(shù)后第4、6、8周，與正常對照組相比，Ob+RYGB組大鼠體質(zhì)量無顯著差異(P＞0.05)。
　　2.術(shù)前術(shù)后GTT、PTT、ITT比較
　　高脂造模12周后，與正常對照組大鼠相比，Ob組大鼠糖耐量受損，胰島素耐量減低，糖異生水平增加。術(shù)后第4、5、6周，與Ob組、Ob+Sham組大鼠比較，Ob+RYGB組大鼠術(shù)后糖異生水平降低，
　　葡萄糖糖耐受能力增強，胰島素敏感性改善，GT

7、T、PTT、ITT血糖時間曲線下面積顯著降低(P<0.05)。
　　3.術(shù)后各組大鼠FBG、FINS、GLP-1及HOMA-IR比較
　　術(shù)后第8周，與Ob組、Ob+Sham組大鼠比較，Ob+RYGB組大鼠FBG、FINS及HOMA-IR顯著降低（P<0.05），GLP-1水平顯著升高（ P<0.05）；與正常對照組比較，Ob+RYGB組血漿GLP-1增加（P<0.05），F(xiàn)BG、FINS及HOMA-IR無顯著差異(P＞0.

8、05)。
　　4.術(shù)后血生化指標(biāo)及體脂比率變化比較
　　術(shù)后第8周，與正常對照組相比，Ob組、Ob+Sham組體脂比率明顯升高，血清TG、TC及LDL-c水平增加（P<0.05），ALT、AST、HDL-c改變無顯著差異(P＞0.05)；與Ob組、Ob+Sham組大鼠比較，Ob+RYGB組TG、TC、LDL-c水平及體脂比率明顯降低（P<0.05），ALT、AST及HDL-c改變無顯著差異(P＞0.05)。
　　5.各

9、組大鼠肝臟HE染色、PAS染色比較
　　術(shù)后第8周，與正常對照組相比，Ob組、Ob+Sham組肝細胞脂肪空泡數(shù)量增多，直徑增大，糖原染色紫紅色較淺，糖原沉積明顯減少（P<0.05）；與Ob組、Ob+Sham組大鼠比較，Ob+RYGB組大鼠肝細胞脂肪空泡數(shù)量減少，直徑減小，糖原染色紫紅色加深，糖原沉積明顯增加（P<0.05）。
　　6.術(shù)后肝臟糖代謝相關(guān)指標(biāo)基因表達情況
　　術(shù)后第8周，與正常對照組相比，Ob組、Ob+S

10、ham組大鼠肝臟中Pepck、G6pase、Gsk-3β及Ptp1b mRNA表達顯著升高，Gs mRNA表達顯著降低（P<0.05）；與Ob組、Ob+Sham組比較，Ob+RYGB組大鼠Pepck、G6pase、Gsk-3β及Ptp1b mRNA表達顯著降低，Gs mRNA表達顯著升高（P<0.05）。
　　7.術(shù)后肝胰島素信號途徑相關(guān)蛋白表達WB及PTP1B免疫組化結(jié)果
　　術(shù)后第8周，與正常對照組相比，Ob組、Ob+S

11、ham組肝臟中IRS1、Akt及FoxO1的磷酸化程度降低，PTP1B蛋白表達顯著升高（P<0.05）；與Ob組、Ob+Sham組比較，Ob+RYGB組中IRS1、Akt及FoxO1的磷酸化程度升高，PTP1B蛋白表達顯著降低（P<0.05）。
　　實驗結(jié)論：
　　1.RYGB能有效減輕肥胖癥大鼠的體重及空腹血糖，改善糖耐量受損及胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)，表明RYGB手術(shù)對治療肥胖癥大鼠有確切療效。
　　2.肥胖大鼠肝臟PTP1