Foxp3在DC細胞中的表達及其對免疫調(diào)節(jié)作用的影響.pdf

1、目的：不同處理的樹突狀細胞（Dendritic cells, DC）胞內(nèi)Foxp3的表達對其免疫調(diào)節(jié)作用的影響。
　　方法：提取BABL/C小鼠骨髓，用含有GM-CSF（10ng/ml）和IL-4（10ng/ml）的RPMI-1640培養(yǎng)基誘導(dǎo)生成DC，在此基礎(chǔ)上給予不同的刺激，分組包括，未成熟DC組（immature dendritic cells,imDC）：5d-imDC組及MSCs組；成熟DC組（m ature dendr

2、itic cells,mDC）：ODN1585組，R848組，LPS組。分別檢測其表型變化及胞內(nèi)Foxp3的表達。用BABL/C小鼠的DC+C57BL/6小鼠的CD4+T細胞進行共培養(yǎng)實驗，CCK-8檢測T細胞的增殖情況；qPCR方法檢測T細胞T-bet、GATA-3、R ORγt、Foxp3的表達，CBA檢測共培養(yǎng)體系上清液中細胞因子表達水平，分析DC對CD4+T細胞分化的影響。
　　結(jié)果：首先流式細胞儀檢測DC表面共刺激分子的

3、表達結(jié)果顯示5d-imDC及MS Cs組表面共刺激分子CD80、CD86的表達較mDC組（ODN1585組，R848組，LPS組）低，表明5d-imDC及MSCs處理的DC保持了其未成熟性。接著本實驗分別從基因及蛋白水平檢測DC中Foxp3表達，結(jié)果顯示imDC胞內(nèi)Foxp3的表達明顯高于mDC（P<0.05），各組mDC中表達的Foxp3無明顯差異。為了判斷各組DC對T細胞的影響，本實驗檢測了CD4+T增殖分化情況，增殖結(jié)果顯示：5d

4、-imDC及MSCs-DC能抑制CD4+T細胞增殖（P<0.05）；而mDC能促進CD4+T細胞增殖（P<0.05），分化結(jié)果顯示5d-imDC及MSCs-DC中GATA-3、Foxp3的表達較其他各組高，表達的T-bet、RORγt較其他組低，表明imDC可以誘導(dǎo)CD4+T細胞向免疫抑制性的T細胞亞型分化，而mDC可以誘導(dǎo)CD4+T細胞向Th1方向分化。最后本實驗檢測了共培養(yǎng)上清液中細胞因子表達，結(jié)果表明5d-imDC及MSCs-DC