骨髓間質(zhì)干細胞的免疫調(diào)節(jié)作用及其對膠原誘導關節(jié)炎影響的研究.pdf

1、目的：研究骨髓間質(zhì)干細胞(Mesenchymal stem cell，MSC)的免疫調(diào)節(jié)作用，觀察骨髓MSC對膠原誘導的關節(jié)炎(Collagen-induced arthritis，CIA)的影響，探討骨髓MSC用于膠原誘導的關節(jié)炎治療的可能機制，為免疫相關性疾病的免疫干預研究提供新的思路。
　　 方法：
　　 (1)從胚胎及Wistar大鼠股骨中分離培養(yǎng)MSC，經(jīng)克隆化分選出形態(tài)均一的細胞，用流式細胞術檢測其表面標志以

2、鑒定其純度。
　　 (2)采用3H-TdR法、RT-PCR和Real-time PCR檢測經(jīng)MSC處理的人外周血單個核細胞的增殖及其細胞因子表達，以未經(jīng)MSC處理的同一人外周血單個核細胞標本作對照。
　　 (3)應用3H-TdR法、Real-time PCR以及Western-blot檢測MSC對小鼠樹突狀細胞系細胞(D2SC)的增殖及其分泌IP-10(IFNγ-inducibleprotein10，也稱CXCL10)的

3、作用。
　　 (4)建立膠原誘導的DBA/1小鼠類風濕性關節(jié)炎模型，將2×106的MSCs經(jīng)尾靜脈注射到CIA小鼠體內(nèi)，采用測量關節(jié)腫脹程度、HE染色、ELISA、Real-time PCR以及Western-blot等方法觀察MSC的干預結(jié)果。
　　 (5)利用Real-time PCR方法觀察經(jīng)MSC干預后的CIA模型鼠TLR8和TLR9的表達情況。
　　 結(jié)果：
　　 (1)MSC對ConA刺激的單

4、個核細胞增殖的影響與MSC和單個核細胞的比值有關，當比值較大時MSC對ConA刺激的單個核細胞增殖有明顯的抑制作用，但是比值較小時反而會促進其增殖。MSC對單個核細胞分泌TGF-β1無顯著性影響，MSC對ConA刺激的單個核細胞分泌IL-6也無顯著性影響，卻促進單個核細胞分泌IL-10，減少單個核細胞分泌IL-8。
　　 (2)MSC促進了D2SC的增殖并提高了D2SC的IP-10表達水平，提示MSC可通過對抗原提呈細胞的作用參

5、與免疫應答的調(diào)節(jié)。
　　 (3)建立了膠原誘導的DBA/1小鼠類風濕性關節(jié)炎模型(CIA)。應用MSC干預后發(fā)現(xiàn)，模型鼠關節(jié)處的紅腫消失；關節(jié)局部浸潤的炎癥細胞減少；外周血TNF-α的分泌水平降低；IP-10、CXCR3和IL-10表達水平增加；而IL-1β、IL-17A、TLR8以及TLR9的表達水平的降低。
　　 結(jié)論：
　　 (1)MSC具有下調(diào)免疫應答或改變免疫細胞亞群平衡的作用。
　　 (2)M

6、SC對免疫應答的調(diào)節(jié)作用不僅反映在其對單個核細胞的作用，還體現(xiàn)在其對抗原提呈細胞的影響。MSC可通過促進D2SC的增殖和增強D2SC分泌IP-10的能力發(fā)揮免疫應答調(diào)節(jié)作用。
　　 (3)MSC可緩解膠原誘導的DBA/1小鼠類風濕性關節(jié)炎的癥狀，可能機制與下列因素相關：①MSC明顯降低了參與炎癥的細胞因子IL-1β、IL-17A和TNF-α的表達。②MSC促進單個核細胞分泌IL-10，而IL-10可通過糾正Th1細胞的極化狀態(tài)，

7、促進Th1/Th2細胞平衡的恢復，有助于免疫炎癥的控制。③MSC干預后，模型鼠機體的TLR8、TLR9表達水平降低，表明MSC可能通過TLR信號的干預而改善關節(jié)損傷癥狀。
　　 總之，MSC通過影響單個核細胞增殖和促進D2SC增殖與分泌IP-10調(diào)節(jié)免疫功能；MSC改善膠原誘導的關節(jié)炎癥狀，其可能機制與降低細胞炎癥因子表達，促進Th1/Th2細胞平衡恢復以及下調(diào)TLR(TLR8，TLR9)信號有關。這些研究將為MSC治療免疫相關