納米氫氧化鋁吸附抗淋病LTB-PorB重組蛋白疫苗的免疫活性研究.pdf

1、目的:
　　制備納米氫氧化鋁佐劑,吸附抗淋病PorB、LTB-PorB重組蛋白疫苗,通過鼻飼途徑免疫雌性BALB/c小鼠,分析其免疫活性,探討納米氫氧化鋁佐劑能否輔佐蛋白疫苗誘導(dǎo)產(chǎn)生更有效的特異性體液免疫和細胞免疫,尤其是高效的黏膜免疫,為尋找經(jīng)黏膜途徑感染病原體的疫苗遞送載體進行有益探索和提供實驗依據(jù)。
　　方法:
　　1.采用微乳液法制備納米氫氧化鋁顆粒,檢測其粒徑大小并進行透射電鏡測定,同時進行細胞毒性試驗和動物

2、毒性試驗以評價其作為疫苗載體的安全性;
　　2.將課題組已構(gòu)建的原核表達重組質(zhì)粒 pET-30a/LTB、pET-30a/porB和pET-30a/LTB-PorB在大腸桿菌BL21中誘導(dǎo)表達重組蛋白,鑒定后大量制備并純化;
　　3.吸附試驗比較納米氫氧化鋁和常規(guī)鋁佐劑吸附重組蛋白后的穩(wěn)定性;
　　4.納米氫氧化鋁顆粒吸附重組疫苗蛋白,鼻飼途徑免疫雌性BALB/c小鼠,檢測重組蛋白誘導(dǎo)的體液免疫和細胞免疫水平。

3、　　結(jié)果:
　　1.采用微乳液法成功制備了納米氫氧化鋁顆粒,經(jīng)檢測其粒徑分布范圍為100-200nm,峰值為148.12nm。經(jīng)細胞及動物毒性試驗分析,制備的納米氫氧化鋁顆粒符合本次試驗的要求;
　　2.納米氫氧化鋁(Nano)分別吸附的PorB(Nano-P)和LTB-PorB(Nano-L-P)重組蛋白通過鼻飼途徑免疫雌性BALB/c小鼠,其血清特異性IgG和生殖道黏膜特異性sIgA水平隨免疫時間的增加呈上升趨勢;第3次

4、免疫后(第6w) IgG A450值分別為0.724±0.076,0.854±0.146,明顯高于PBS組、Nano組、LTB組、PorB組、LTB-PorB組五組,有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01);第6周生殖道灌洗液 sIgA450值分別為0.487±0.052,0.673±0.122,明顯高于其他五組,有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01);Nano-P組和Nano-L-P組脾淋巴細胞誘生的IL-4水平均明顯高于其他五組,有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.0

5、1); IFN-γ水平與其他五組比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);脾淋巴細胞刺激指數(shù)與其他五組比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);Nano-P和Nano-L-P之間比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);IgG2a比IgG1比值均小于1,提示納米氫氧化鋁吸附重組蛋白以誘導(dǎo)Th2型體液免疫應(yīng)答為主。
　　結(jié)論:
　　1.納米氫氧化鋁作為疫苗遞送載體,通過鼻飼途徑免疫小鼠,能促進 PorB和LTB-PorB重組蛋白產(chǎn)生較高水平的特異性體