補(bǔ)氣活血法對(duì)慢性支氣管炎肺氣虛證大鼠TH1和TH2相關(guān)細(xì)胞因子的影響.pdf

1、目的：慢性支氣管炎（CB）是呼吸系統(tǒng)的常見病，是一種氣管支氣管粘膜以及周圍組織的一種非特異性炎癥，主要表現(xiàn)為咳嗽、咳痰或伴有喘息及反復(fù)發(fā)作。隨著人口的高齡化與大氣的污染，慢性支氣管炎的發(fā)病日趨增多，嚴(yán)重影響人們的身體健康。肺氣虛證是慢性支氣管炎的主要證候形式。近年來(lái)，許多學(xué)者結(jié)合現(xiàn)代科技手段，從多方面對(duì)慢性支氣管炎進(jìn)行了較為廣泛的研究，認(rèn)為慢性支氣管炎從炎癥的角度來(lái)分析，可以歸納為促炎因子和抗炎因子體系失衡引起的支氣管炎癥。促炎因子和抗

2、炎因子分泌的來(lái)源大約可以分三大類：T細(xì)胞分泌、單核巨噬細(xì)胞分泌、中性粒細(xì)胞（PMN）分泌。TH1和TH2細(xì)胞是由T細(xì)胞進(jìn)一步分化而來(lái)，可以分泌促炎因子和抗炎因子，與支氣管炎癥密切相關(guān)。但關(guān)于TH1和TH2相關(guān)細(xì)胞因子對(duì)肺氣虛證的慢性支氣管炎發(fā)病的影響未見報(bào)道。本研究采用病證合一的動(dòng)物模型，以改良煙熏法復(fù)制慢性支氣管炎肺氣虛證大鼠模型，通過檢測(cè)血清和肺組織中的IL-4和IFN-γ的含量，并以補(bǔ)氣活血為法，組成補(bǔ)氣活血方進(jìn)行干預(yù)，探討其治療

3、作用的機(jī)制，從而進(jìn)一步揭示慢性支氣管炎肺氣虛證的證候本質(zhì)，并為臨床防治該病證提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：將50只Sprague Dawley（SD）大鼠（雌雄各半）置于實(shí)驗(yàn)環(huán)境中適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為5組（每組10只）：①正常對(duì)照組（正常組，control group）；②CB模型組（模型組，model group）；③補(bǔ)肺湯組（陽(yáng)性藥物對(duì)照組，prednisone group）；④補(bǔ)氣活血方低劑量組（低劑量組，low-do

4、se group）；⑤補(bǔ)氣活血方高劑量組（高劑量組，high-dose group）。根據(jù)文獻(xiàn)方法，采用改良煙熏法復(fù)制慢性支氣管炎肺氣虛證動(dòng)物模型。將造模各組大鼠置于特制的1m×1m×1m的煙室中，用刨花、鋸末、煙葉各50g點(diǎn)燃熏煙，每日2次，每次30分鐘，持續(xù)40天。正常對(duì)照組則置于正常無(wú)煙環(huán)境中飼養(yǎng)。5組均于造模結(jié)束后第2天起連續(xù)灌胃生理鹽水或藥物21天。給正常組與模型組大鼠灌服生理鹽水（10ml/kg）每日1次灌胃；給低劑量組和高

5、劑量組大鼠灌服補(bǔ)氣活血方中藥水煎劑（12.8g/kg、25.6/kg，相當(dāng)于臨床成人用藥量的7倍和14倍），每日1次灌胃；給補(bǔ)肺湯組大鼠灌服補(bǔ)肺湯中藥水煎劑（8.36g/kg，相當(dāng)于臨床成人用藥量的7倍），每日1次灌胃。
　　 檢測(cè)樣本的制備：5組均連續(xù)灌胃21天，各組動(dòng)物均于治療結(jié)束后，采用10％水合氯醛0.3.5ml/100g麻醉，腹主動(dòng)脈取血，3500r/min離心5 min。分離出血清，-20℃凍存待檢。
　　

6、取右側(cè)肺臟中部組織1cm×1cm×1cm大小，用4％多聚甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋、切片。
　　 肺組織勻漿的制備：將肺組織用冰生理鹽水沖洗，濾紙吸濕后，稱取濕重0.3g左右，加入預(yù)冷的生理鹽水，在冰浴中快速研磨制成10％的肺組織勻漿。4℃6000r/min離心5min，提取上清液，-20℃凍存待檢。
　　 行HE染色和SP免疫組化染色，光學(xué)顯微鏡下觀察肺組織形態(tài)結(jié)構(gòu)以及IL-4、IFN-γ的表達(dá)情況。同時(shí)，用放射免疫法檢測(cè)

7、血清和肺組織中IL-4、IFN-γ等指標(biāo)變化。
　　 結(jié)論：
　　 1、慢性支氣管炎肺氣虛證狀態(tài)下，血液和肺組織中能拮抗炎癥介質(zhì)的釋放而減輕氣道炎癥的細(xì)胞因子IL-4含量的明顯降低，以及促進(jìn)炎癥反應(yīng)發(fā)生的細(xì)胞因子IFN-γ含量的明顯增加，共同介導(dǎo)了慢性支氣管炎肺氣虛證的非特異性炎癥反應(yīng)。此種變化，是慢性支氣管炎肺氣虛證可能的發(fā)病機(jī)制之一。
　　 2、補(bǔ)氣活血方可以通過升高血清、肺組織中IL-4含量，降低血清、肺組