雌激素對NF1siRNA腫瘤細(xì)胞模型生物學(xué)行為影響的研究.pdf

1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文雌激素對NF1siRNA腫瘤細(xì)胞模型生物學(xué)行為影響的研究姓名：程芙蓉申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師：周列民20070520中山大學(xué)碩士論文雌激素對NFlsiRNA腫癌細(xì)胞模型生物學(xué)行為影響的研究后期出現(xiàn)，成年期明顯增加，晚年則停止或減少，這與體內(nèi)雌激素分泌的生理特征有明顯的相關(guān)性。雌激素可通過調(diào)控抑癌基因和激活端粒酶等多種機(jī)制促進(jìn)多系統(tǒng)腫瘤的發(fā)生發(fā)展，而雌激素受體拮抗劑可抑制腫瘤的復(fù)發(fā)，提示神經(jīng)纖維瘤的形成

2、除了因NFl基因突變導(dǎo)致施旺細(xì)胞異常增生外，體內(nèi)雌激素水平的變化可能也參與和介導(dǎo)了神經(jīng)纖維瘤的形成和發(fā)展。RNAi技術(shù)是通過雙鏈RNA介導(dǎo)的特異性降解靶mRNA導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄后基因表達(dá)水平下降的一種現(xiàn)象，是近年發(fā)展起來的特異性抑制基因表達(dá)的重要手段，被廣泛用于基因功能的研究。最近，發(fā)卡樣siRNA表達(dá)載體的應(yīng)用為RNA干擾技術(shù)的推廣應(yīng)用開辟了廣闊的前景，其方法是通過合成靶基因的特異性發(fā)卡樣短鏈寡核苷酸序列，定向亞克隆入真核表達(dá)載體，再轉(zhuǎn)染細(xì)胞

3、后，通過胞內(nèi)自身的RNA聚合酶III的作用，自動(dòng)釋放出雙鏈siRNA干預(yù)特異性靶基因mRNA的翻譯。該方法簡便易行，構(gòu)建的載體也易保存和大量擴(kuò)增，因此倍受關(guān)注。業(yè)已證明：siRNA干擾技術(shù)是目前研究基因功能最有效的方法，在體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)中得到廣泛證實(shí)。2、研究目的本研究旨在采用RNAi技術(shù)，利用本課題組前期構(gòu)建、篩選的NFl基因特異性siRNA質(zhì)粒表達(dá)載體，特異性的下調(diào)C57BL／6小鼠離體施旺細(xì)胞中NFl基因的表達(dá)，構(gòu)建小鼠NFlsiRN

4、A腫瘤細(xì)胞模型，并通過結(jié)合離體施旺細(xì)胞雌激素的干預(yù)，探討雌激素對NFl基因表達(dá)活性的調(diào)控作用，及其介導(dǎo)的施旺細(xì)胞生物學(xué)行為改變，以研究雌激素在NFl神經(jīng)纖維瘤發(fā)病機(jī)制中的作用。從而，為神經(jīng)纖維瘤的防治提供新思路。3、研究方法31雌激素對NFlsiRNA體外腫瘤細(xì)胞模型生物學(xué)行為的影響3L1取出生后4—7天的野生型C57BL／6乳鼠的雙側(cè)坐骨神經(jīng)以及雙側(cè)臂叢神經(jīng)進(jìn)行施旺細(xì)胞的分離培養(yǎng)。312應(yīng)用含有Geneticin的培養(yǎng)液，結(jié)合酶快速消