雌激素及雌激素受體β對大腸癌發(fā)生及生物學行為的影響.pdf

1、流行病學調(diào)查顯示，絕經(jīng)后婦女發(fā)生散發(fā)性大腸癌的風險較絕經(jīng)前婦女明顯增加，而采取以雌激素為主的激素替代治療可以顯著降低發(fā)生大腸癌的風險和改善預后。雌激素是通過雌激素受體介導產(chǎn)生效應的。目前發(fā)現(xiàn)雌激素受體存在兩種亞型，Erα和Erβ。雌激素受體的兩種亞型的生物學效應不完全相同。不同組織中Erα和Erβ的相對表達量存在差異。在正常大腸粘膜中，雌激素受體的表達以Erβ為主，Erα的表達極低。多項臨床研究顯示，Erβ在大腸癌中的表達明顯減少。在乳

2、腺癌、前列腺癌等腫瘤的研究中發(fā)現(xiàn)，Erβ能夠抑制腫瘤的生長以及侵襲。這些發(fā)現(xiàn)提示，雌激素和Erβ具有預防和抑制大腸癌的發(fā)生發(fā)展的作用。那么雌激素和雌激素受體β
　　 究竟如何并通過何種機制影響大腸癌的發(fā)生和生物學行為呢？本文從體內(nèi)和體外實驗研究雌激素和雌激素受體β對大腸癌的影響，并探討其機制。
　　 第一部分：卵巢切除對二甲肼誘導的大腸腫瘤形成及微衛(wèi)星不穩(wěn)定的影響
　　 目的：觀察卵巢切除對二甲肼誘導的大鼠大腸腫

3、瘤形成和微衛(wèi)星不穩(wěn)定(MSI)的影響，探討MSI在女性絕經(jīng)后散發(fā)性大腸癌發(fā)生中的作用。
　　 方法：40只雌性Wistar大鼠隨機分為假手術對照組（Sham組）和卵巢切除組（OVX組），用誘導劑二甲肼（DMH）進行腹腔內(nèi)注射20 次（1 次/周,20mg/kg體重）,給藥結(jié)束后10 周時處死所有大鼠收集腫瘤。用熒光標記PCR擴增腫瘤基因組的6個微衛(wèi)星位點，應用全自動DNA測序分析儀檢測MSI的發(fā)生。
　　 結(jié)果：OVX組

4、平均腫瘤數(shù)明顯高于Sham組(3.6±1.4 vs 2.4±1.6，P<0.05)。OVX組中MSI陽性腫瘤的所占比例明顯高于Sham組(32.1% vs 10.8%，P<0.05)。OVX組中多位點出現(xiàn)MSI的腫瘤所占比例亦高于Sham組(18.9% vs 2.7%，P<0.05)。
　　 結(jié)論：卵巢切除促進了DMH誘導的大鼠大腸腫瘤形成并增加了MSI的發(fā)生率。微衛(wèi)星不穩(wěn)定途徑可能在絕經(jīng)后大腸癌的發(fā)生中起重要作用。
　　

5、 第二部分：雌激素及雌激素受體β對大腸癌細胞增殖和凋亡的影響
　　 目的：觀察雌激素以及雌激素受體β（Erβ）過表達對大腸癌細胞增殖和凋亡的影響，并探討其機制。
　　 方法：以脂質(zhì)體介導的Erβ基因轉(zhuǎn)染SW480細胞，G418篩選陽性克隆(SW480-C1-Erβ)。RT-PCR及Western印跡法鑒定Erβ的過表達。以正常SW480細胞和轉(zhuǎn)染了空質(zhì)粒的SW480細胞(SW480-pEGFP-C1)作為對照，在無雌激

6、素或者有雌激素作用的條件下，用四甲基偶氮唑藍比色法（MTT法）檢測細胞增殖，采用流式細胞術檢測細胞凋亡率，通過實時熒光定量RT-PCR方法檢測凋亡相關基因survivin和Bax mRNA的表達變化。
　　 結(jié)果：SW480和SW480-pEGFP-C1細胞中ErβmRNA和蛋白的表達較低，而穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的SW480-C1-Erβ細胞中ErβmRNA和蛋白的表達明顯增加。無論是在無雌激素還是有雌激素作用的條件下均可發(fā)現(xiàn)：SW480-

7、C1-Erβ細胞的增殖速度和凋亡率分別明顯慢于和高于SW480細胞（或SW480-pEGFP-C1細胞)，SW480-C1-Erβ細胞中survivin mRNA和Bax mRNA的表達分別明顯低于或高于SW480細胞（或SW480-pEGFP-C1細胞）。在SW480-C1-Erβ細胞中，雌激素作用時細胞的增殖速度和凋亡率分別明顯低于和高于無雌激素作用的細胞，而且雌激素作用時細胞的survivin和Bax mRNA的表達分別明顯低于和

8、高于無雌激素作用的細胞。而在SW480細胞（或SW480-pEGFP-C1細胞）中，雌激素作用組細胞的增殖、凋亡率以及survivin和Bax mRNA的表達與無雌激素作用組相比較無明顯差異。
　　 結(jié)論：Erβ過表達可以同時以呈配體非依賴性和配體依賴性的方式抑制細胞增殖和增加細胞凋亡，可能與調(diào)控凋亡相關基因survivin和Bax的表達有關。
　　 第三部分：雌激素及雌激素受體β對大腸癌細胞侵襲轉(zhuǎn)移的影響
　　

9、 目的：觀察雌激素以及雌激素受體β過表達對大腸癌細胞侵襲能力的影響，研究其對侵襲轉(zhuǎn)移相關基因E-鈣粘蛋白和CXCR4的影響。
　　 方法：在無雌激素或者有雌激素作用的條件下，利用Transwell小室法測定SW480細胞、SW480-pEGFP-C1細胞和SW480-C1-Erβ細胞的侵襲能力；采用實時熒光定量RT-PCR法和Western blot法檢測各組細胞中E-鈣粘蛋白和CXCR4基因的mRNA和蛋白表達。
　　

10、 結(jié)果：在無雌激素作用的條件下，SW480-C1-Erβ細胞的侵襲能力和CXCR4的表達低于SW480細胞（或SW480-pEGFP-C1細胞)。在雌激素作用的條件下，SW480-C1-Erβ細胞的侵襲能力和E-鈣粘蛋白的表達分別低于和高于SW480細胞（或SW480-pEGFP-C1細胞)。在SW480-C1-Erβ細胞中，雌激素作用時腫瘤細胞的侵襲能力和E-cadherin的表達分別明顯低于和高于無雌激素作用的細胞，而CXCR4的表