毛細(xì)管電泳體內(nèi)藥物分析方法研究及應(yīng)用.pdf

1、 重慶大學(xué)博士學(xué)位論文 毛細(xì)管電泳體內(nèi)藥物分析方法研究及應(yīng)用 博士研究生：陳 華 指 導(dǎo) 教 師：夏之寧 教授（博導(dǎo)） 學(xué)科、專業(yè)：生物醫(yī)學(xué)工程 重慶大學(xué)生物工程學(xué)院 二 OO 七年十月 I摘 要 體內(nèi)藥物分析是通過分析手段了解藥物在體內(nèi)數(shù)量與質(zhì)量的變化，獲得各種藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)、代謝的方式和途徑等信息的一門學(xué)科。體內(nèi)藥物分析的對(duì)象具有多樣性，其樣品（稱之為生物樣品）的特點(diǎn)是微量藥物存在于大量的生物介質(zhì)中，待測(cè)組分濃度低，內(nèi)源性

2、物質(zhì)干擾多。預(yù)處理和提高檢測(cè)限是體內(nèi)藥物分析需要克服的兩大難題。本論文針對(duì)這兩個(gè)問題進(jìn)行探索，分別建立預(yù)處理簡(jiǎn)單的透析進(jìn)樣毛細(xì)管電泳方法和靈敏的電化學(xué)安培檢測(cè)法和化學(xué)發(fā)光檢測(cè)法，考察了方法的性能，并進(jìn)行了應(yīng)用研究。主要內(nèi)容如下： 1． 通過在毛細(xì)管進(jìn)樣端口內(nèi)相轉(zhuǎn)化法原位制備透析膜， 建立了透析進(jìn)樣毛細(xì)管電泳方法，使毛細(xì)管電泳同時(shí)具有分離和透析的功能。考察優(yōu)化了膜制作的材料和工藝，并對(duì)不同組成的成膜液制作的膜對(duì)大分子的攔截效果進(jìn)行了研究。

3、成膜液配方為 20% PSf，8% PEG 600，溶劑/非溶劑對(duì)為 DMF/H2O，揮發(fā)時(shí)間 30s，成膜液和凝固浴溫度分別為：35-55℃和 15-25℃。制作的透析膜可有效攔截以牛血清白蛋白為例的大分子，即膜的截割分子量小于 65 kDa。而采用 25% 的 PSf，不含 PEG 600 的成膜液制作的膜可部分?jǐn)r截溶菌酶。 2． 對(duì)具有透析功能的毛細(xì)管電泳方法的性能進(jìn)行了評(píng)價(jià)。 由于透析膜在毛細(xì)管進(jìn)樣端原位生成， 與毛細(xì)管結(jié)合緊密

4、， 透析單元和電泳單元之間幾乎無死體積，毛細(xì)管電泳分離的柱效損失?。Х纫蛑?gt;35 000 /m） ，電泳重現(xiàn)性好，連續(xù) 5次進(jìn)樣撲爾敏峰高、峰面積 RSD 分別為 0.8%和 4.6%。膜的穩(wěn)定性好，pH 耐受范圍寬，壽命在 12 h。 3． 對(duì)透析進(jìn)樣毛細(xì)管電泳方法應(yīng)用于活體分析的可能性進(jìn)行了研究。 以小分子撲爾敏和咖啡因混合溶液為對(duì)象考察進(jìn)樣峰面積與透析時(shí)間的關(guān)系，以咖啡因?yàn)檠芯繉?duì)象考察濃度與進(jìn)樣量的關(guān)系，表明該方法可以采

5、用平衡透析進(jìn)樣，為活體分析提供了可能。 此外還進(jìn)行了電化學(xué)檢測(cè)研究 （柱端安培檢測(cè)） ， 提高了檢測(cè)靈敏度， 使本方法適用于體內(nèi)低濃度樣品的分析檢測(cè)， 擴(kuò)大了本方法的使用范圍。4． 透析進(jìn)樣毛細(xì)管電泳的實(shí)際應(yīng)用。 將本方法應(yīng)用于咖啡牛奶中游離咖啡因的直接分析。咖啡牛奶不需要任何預(yù)處理，蛋白等干擾小，測(cè)定步驟簡(jiǎn)單，測(cè)得咖啡因的含量為 0.68 mmol·L-1；將本方法應(yīng)用于內(nèi)源性物質(zhì)葡萄糖的測(cè)定，全血樣品用緩沖液稀釋后直接進(jìn)樣