相互作用分析的毛細管電泳方法研究與應(yīng)用.pdf

1、相互作用在化學(xué)體系、生物化學(xué)體系和環(huán)境體系中廣泛存在,是各種生理活動得以正常進行和生理功能得以正常發(fā)揮的基礎(chǔ)。毛細管電泳具有分離效率高、分析速度快、樣品用量少等特點,在研究分子相互作用方面具有獨到的優(yōu)勢。因此開展相互作用研究,特別是毛細管電泳相互作用分析及應(yīng)用研究在手性藥理學(xué)、環(huán)境毒理學(xué)、藥物創(chuàng)制學(xué)及生物醫(yī)學(xué)工程領(lǐng)域有重要意義。
　　相互作用有多種表達方式,包括結(jié)合常數(shù)、結(jié)合位點及自由能變等參數(shù),其中結(jié)合常數(shù)是表征相互作用強弱最重

2、要的參數(shù)之一。
　　本文在以毛細管電泳為手段研究分子相互作用的基礎(chǔ)上,發(fā)展了分子相互作用的毛細管電泳分析(CEIA)方法,特別是針對復(fù)雜體系和電中性分子的相互作用分析方法。將CEIA方法應(yīng)用于小分子與生物大分子、小分子與細菌和雞血紅細胞的相互作用分析,以獲得相互作用結(jié)合常數(shù)。論文進一步基于相互作用的原理,開展了以可溶性淀粉、糊精和麥芽糖為手性添加劑的西酞普蘭毛細管電泳手性分離,并對手性識別相互作用機理進行了較為深入的研究。具體主要

3、內(nèi)容包括:
　　(1)應(yīng)用毛細管電泳方法,使用十二烷基硫酸鈉膠束賦予中性客體分子對-硝基苯胺和2-氨基吡啶有效淌度,研究了中性主體分子18-冠醚-6與對-硝基苯胺和2-氨基吡啶的相互作用,建立了中性分子相互作用的毛細管電泳分析方法。以毛細管電泳峰漂移方法,測得了中性主體與中性客體分子之間的相互作用結(jié)合常數(shù)。
　　(2)將毛細管電泳相互作用分析方法從一種物質(zhì)與另一種物質(zhì)的相互作用的測定發(fā)展到多個組分共存時與另一物質(zhì)的相互作用測

4、定,達到了同時評價各組分與指定分子的結(jié)合能力的目的。通過這種方法測定了大黃中的有效成分大黃素、蘆薈大黃素和大黃酚與β-環(huán)糊精和羥丙基-β-環(huán)糊精的結(jié)合常數(shù)。
　　(3)應(yīng)用毛細管電泳區(qū)帶灌注-自標(biāo)記技術(shù),研究了麻黃堿、咖啡因、對乙酰氨基酚與牛血清白蛋白的相互作用以及麻黃堿與雞血紅細胞的相互作用。
　　(4)通過對細菌樣品預(yù)處理方法、緩沖液種類、檢測波長以及聚合物添加劑對分離度影響等的考察,研究了大腸桿菌與金黃色葡萄球菌的毛細

5、管電泳行為,獲得了優(yōu)化的毛細管電泳分離條件,實現(xiàn)了大腸桿菌與金黃色葡萄球菌的快速分離,從而建立起一種輔助的細菌定性識別方法。進一步,研究了抗菌藥物阿奇霉素與金黃色葡萄球菌的相互作用,發(fā)現(xiàn)阿奇霉素能與金黃色葡萄球菌的表面蛋白發(fā)生相互作用,從而引起金黃色葡萄球菌淌度的變化。
　　(5)基于競爭相互作用原理,采用非手性的C18色譜柱,通過在流動相中加入手性選擇劑β-環(huán)糊精的方法實現(xiàn)了西布曲明對映體的拆分。西布曲明對映體在5min內(nèi)得到基

6、線分離，分離度Rs達到3.2。
　　(6)首次采用可溶性淀粉、糊精和麥芽糖作為手性選擇劑，實現(xiàn)了西酞普蘭的毛細管電泳手性分離通過電導(dǎo)和熒光方法，研究了麥芽糖的手性識別機理。結(jié)果表明，麥芽糖作為手性選擇劑，存在一個“轉(zhuǎn)折濃度”(11％一12%)。當(dāng)麥芽糖濃度在“轉(zhuǎn)折濃度”以下時，沒有對西酞普蘭表現(xiàn)出手性識別能力;高于”轉(zhuǎn)折濃度”時，麥芽糖分子發(fā)生聚集形成具有疏水空腔的聚集體，從而具有手性識別功能。
　　(7)模擬生物大分子與配