藥物與蛋白和細(xì)胞相互作用的毛細(xì)管電泳研究.pdf

1、前人在毛細(xì)管電泳分子相互作用分析領(lǐng)域已做了大量工作，并取得了豐碩成果。在研究生物大分子或細(xì)胞與藥物之間的相互作用時(shí)，常會(huì)遇到生物大分子在毛細(xì)管上吸附、紫外檢測背景高等問題。為解決這些難題，人們對(duì)研究方法進(jìn)行了不斷改進(jìn)和發(fā)展，提出了區(qū)段灌注技術(shù)。 血清白蛋白是血液中重要的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，研究血清白蛋白與藥物的相互作用，對(duì)了解藥物在體內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn)、吸收有重要意義，也可為新藥的篩選和開發(fā)提供一定的依據(jù)。細(xì)胞是生物體形態(tài)結(jié)構(gòu)和生命活動(dòng)的基本單位，

2、藥物與細(xì)胞的相互作用研究無疑對(duì)藥理研究還是新藥開發(fā)都具有重要的意義。本文包括兩個(gè)部分，第一部分是藥物與血清白蛋白的相互作用分析，第二部分是藥物與細(xì)胞的相互作用研究。 第一部分，在區(qū)段灌注技術(shù)基礎(chǔ)上，建立了區(qū)段灌注-自標(biāo)記的毛細(xì)管電泳分析方法，并將該方法應(yīng)用于藥物與蛋白相互作用的毛細(xì)管電泳分析。本部分對(duì)藥物蛋白相互作用的兩個(gè)體系進(jìn)行了研究，并求得了相應(yīng)的結(jié)合常數(shù)。這兩個(gè)體系分別是：人血清白蛋白(HSA)-煙堿相互作用體系，其結(jié)合常

3、數(shù)為1.66×103mol-1L；牛血清白蛋白(BSA)-麻黃堿(EPH)，咖啡因(CAF)和撲熱息痛(ACEP)相互作用體系，它們的結(jié)合常數(shù)分別為KBSA-EPH=3.38×104mol-1L，KBSA-CAF=4.79×104mol-1L和KBSA-ACEP=6.13×104mol-1L。 第二部分，采用第一部分建立的區(qū)段灌注-自標(biāo)記技術(shù)，對(duì)麻黃堿、咖啡因、腎上腺素與紅細(xì)胞的相互作用進(jìn)行了研究，并采用了在形式上與分子間相互作

4、用結(jié)合常數(shù)相似的常數(shù)——結(jié)合參數(shù)，來表達(dá)藥物與細(xì)胞間的結(jié)合情況。這樣，利用結(jié)合參數(shù)，我們就可對(duì)藥物與細(xì)胞的結(jié)合情況進(jìn)行判斷。通過對(duì)不同實(shí)驗(yàn)所得的麻黃堿與細(xì)胞的結(jié)合參數(shù)比較，我們認(rèn)為藥物與細(xì)胞的結(jié)合參數(shù)重現(xiàn)性不高，因而對(duì)藥物間結(jié)合參數(shù)的比較要在同一次實(shí)驗(yàn)中完成。本研究還對(duì)麻黃堿、咖啡因與細(xì)胞的結(jié)合參數(shù)進(jìn)行了比較，結(jié)果表明咖啡因與細(xì)胞的結(jié)合能力比麻黃堿的強(qiáng)。本文認(rèn)為這種差別是由麻黃堿和咖啡因在細(xì)胞膜上不同的分配行為所致。另外，本研究在對(duì)麻黃

5、堿、腎上腺素與紅細(xì)胞間的結(jié)合參數(shù)的比較中發(fā)現(xiàn)，腎上腺素與細(xì)胞的結(jié)合比麻黃堿強(qiáng)，并從理論上分析認(rèn)為，這種差異源于麻黃堿和腎上腺素與紅細(xì)胞膜上相應(yīng)受體的不同結(jié)合能力。 結(jié)果表明，區(qū)段灌注-自標(biāo)記技術(shù)是毛細(xì)管電泳相互作用分析的一種有效方法。該方法不僅有效地消除了蛋白背景吸收所帶來的干擾問題，成功地克服了蛋白吸附對(duì)研究的影響，而且對(duì)峰漂移模型也作了進(jìn)一步發(fā)展。使用區(qū)段灌注-自標(biāo)記技術(shù)，結(jié)合常數(shù)的計(jì)算比采用Scatchard方程計(jì)算更為精