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文檔簡介
1、前人在毛細管電泳分子相互作用分析領(lǐng)域已做了大量工作,并取得了豐碩成果。在研究生物大分子或細胞與藥物之間的相互作用時,常會遇到生物大分子在毛細管上吸附、紫外檢測背景高等問題。為解決這些難題,人們對研究方法進行了不斷改進和發(fā)展,提出了區(qū)段灌注技術(shù)。 血清白蛋白是血液中重要的轉(zhuǎn)運蛋白,研究血清白蛋白與藥物的相互作用,對了解藥物在體內(nèi)的轉(zhuǎn)運、吸收有重要意義,也可為新藥的篩選和開發(fā)提供一定的依據(jù)。細胞是生物體形態(tài)結(jié)構(gòu)和生命活動的基本單位,
2、藥物與細胞的相互作用研究無疑對藥理研究還是新藥開發(fā)都具有重要的意義。本文包括兩個部分,第一部分是藥物與血清白蛋白的相互作用分析,第二部分是藥物與細胞的相互作用研究。 第一部分,在區(qū)段灌注技術(shù)基礎(chǔ)上,建立了區(qū)段灌注-自標記的毛細管電泳分析方法,并將該方法應(yīng)用于藥物與蛋白相互作用的毛細管電泳分析。本部分對藥物蛋白相互作用的兩個體系進行了研究,并求得了相應(yīng)的結(jié)合常數(shù)。這兩個體系分別是:人血清白蛋白(HSA)-煙堿相互作用體系,其結(jié)合常
3、數(shù)為1.66×103mol-1L;牛血清白蛋白(BSA)-麻黃堿(EPH),咖啡因(CAF)和撲熱息痛(ACEP)相互作用體系,它們的結(jié)合常數(shù)分別為KBSA-EPH=3.38×104mol-1L,KBSA-CAF=4.79×104mol-1L和KBSA-ACEP=6.13×104mol-1L。 第二部分,采用第一部分建立的區(qū)段灌注-自標記技術(shù),對麻黃堿、咖啡因、腎上腺素與紅細胞的相互作用進行了研究,并采用了在形式上與分子間相互作
4、用結(jié)合常數(shù)相似的常數(shù)——結(jié)合參數(shù),來表達藥物與細胞間的結(jié)合情況。這樣,利用結(jié)合參數(shù),我們就可對藥物與細胞的結(jié)合情況進行判斷。通過對不同實驗所得的麻黃堿與細胞的結(jié)合參數(shù)比較,我們認為藥物與細胞的結(jié)合參數(shù)重現(xiàn)性不高,因而對藥物間結(jié)合參數(shù)的比較要在同一次實驗中完成。本研究還對麻黃堿、咖啡因與細胞的結(jié)合參數(shù)進行了比較,結(jié)果表明咖啡因與細胞的結(jié)合能力比麻黃堿的強。本文認為這種差別是由麻黃堿和咖啡因在細胞膜上不同的分配行為所致。另外,本研究在對麻黃
5、堿、腎上腺素與紅細胞間的結(jié)合參數(shù)的比較中發(fā)現(xiàn),腎上腺素與細胞的結(jié)合比麻黃堿強,并從理論上分析認為,這種差異源于麻黃堿和腎上腺素與紅細胞膜上相應(yīng)受體的不同結(jié)合能力。 結(jié)果表明,區(qū)段灌注-自標記技術(shù)是毛細管電泳相互作用分析的一種有效方法。該方法不僅有效地消除了蛋白背景吸收所帶來的干擾問題,成功地克服了蛋白吸附對研究的影響,而且對峰漂移模型也作了進一步發(fā)展。使用區(qū)段灌注-自標記技術(shù),結(jié)合常數(shù)的計算比采用Scatchard方程計算更為精
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