基于毛細(xì)管電泳的多糖與藥物相互作用研究.pdf

1、多糖是生物體內(nèi)不可缺少的生物大分子，其結(jié)構(gòu)的型式及各種生物活性特征，使之具備作為藥物載體的潛質(zhì)，因此多糖與藥物的相互作用研究具有重要意義。由于毛細(xì)管電泳具有分析速度快，準(zhǔn)確性好，所用溶液體系接近生物溶液組成，可以得到較真實(shí)的分子間相互作用信息等優(yōu)勢，所以目前用于多糖與藥物的相互作用研究方法最多。據(jù)此，本研究提出將毛細(xì)管電泳峰漂移法和配體分離法應(yīng)用于天然多糖與抗腫瘤藥物的相互作用研究，并采用Scatchard方程計(jì)算其結(jié)合常數(shù)，為載藥時天

2、然多糖分子量及釋藥部位的選擇提供理論依據(jù)。相關(guān)研究可以提供用以評價多糖作為藥物載體的可行性和效能多糖與藥物的相互作用程度數(shù)據(jù)，在藥物載體的篩選和評價等方面具有明確的研究價值和實(shí)用意義。
　　本文的主要研究工作及結(jié)果如下：
　　1.采用毛細(xì)管電泳峰漂移法研究了β-環(huán)糊精與5-氟尿嘧啶的相互作用。實(shí)驗(yàn)構(gòu)建了β-環(huán)糊精和5-氟尿嘧啶相互作用體系，用毛細(xì)管電泳峰漂移模型測試了系列濃度β-環(huán)糊精與5-氟尿嘧啶在三個不同pH環(huán)境下相互作

3、用的電泳圖譜，采用Scatchard計(jì)算模型獲得了三種條件下的結(jié)合常數(shù)。結(jié)果顯示β-環(huán)糊精與5-氟尿嘧啶在酸性條件下，其相互作用時最強(qiáng)，結(jié)合常數(shù)是232.5；在堿性條件下，其相互作用較弱，結(jié)合常數(shù)是84.24；在中性條件下，幾乎沒有結(jié)合。另外，Scatchard方程線性回歸作圖線性良好，表明兩者為1:1結(jié)合。
　　2.采用毛細(xì)管電泳峰漂移法研究了殼聚糖與5-氟尿嘧啶相互作用。實(shí)驗(yàn)構(gòu)建了殼聚糖和5-氟尿嘧啶相互作用體系，用毛細(xì)管電泳

4、峰漂移模型測試了不同分子量的系列濃度殼聚糖與5-氟尿嘧啶相互作用的電泳圖譜，采用Scatchard計(jì)算模型求解獲得了兩種分子量的結(jié)合常數(shù)。結(jié)果顯示殼聚糖與5-氟尿嘧啶的結(jié)合常數(shù)是5.625×103，殼寡糖與5-氟尿嘧啶的結(jié)合常數(shù)是5.608×104。殼寡糖與5-氟尿嘧啶的結(jié)合常數(shù)比殼聚糖大一個數(shù)量級，說明不同分子量的殼聚糖與5-氟尿嘧啶的相互作用力的大小是不同的，分子量較小殼寡糖更易于與殼聚糖發(fā)生相互作用。這是由于分子量大的殼聚糖較分子

5、量小的殼寡糖空間位阻更大，同時分子量小的殼寡糖，有更多的活性修飾位點(diǎn)，故殼寡糖比殼聚糖更容易與5-氟尿嘧啶結(jié)合。另外，Scatchard方程線性回歸作圖線性良好，表明兩者為1:1結(jié)合。
　　3.采用毛細(xì)管電泳峰漂移法和配體分離法研究了寡聚透明質(zhì)酸與5-氟尿嘧啶及其衍生物的相互作用。實(shí)驗(yàn)構(gòu)建了寡聚透明質(zhì)酸和5-氟尿嘧啶相互作用體系，用毛細(xì)管電泳峰漂移模型測試了系列濃度的寡聚透明質(zhì)酸與5-氟尿嘧啶及其衍生物相互作用的電泳圖譜，同時用毛

6、細(xì)管電泳配體分離法，測試計(jì)算了寡聚透明質(zhì)酸與5-氟尿嘧啶衍生物的結(jié)合常數(shù)，采用Scatchard計(jì)算模型獲得了三種pH條件下的結(jié)合常數(shù)。結(jié)果顯示酸性條件下寡聚透明質(zhì)酸與5-氟尿嘧啶的結(jié)合常數(shù)是726.5，堿性條件下是672.3，Scatchard方程線性回歸圖線性良好，表明兩者為1:1結(jié)合；中性條件下并未得到線性關(guān)系，判斷為在此條件下兩者未結(jié)合。測試的寡聚透明質(zhì)酸與5-氟尿嘧啶衍生物的相互作用，線性回歸相關(guān)性不佳，判斷其可能不是1:1結(jié)

7、合，峰漂移模型不適合進(jìn)一步分析。進(jìn)一步考慮用毛細(xì)管電泳配體分離法，測試電泳圖譜后采用Scatchard方程，進(jìn)一步計(jì)算得到寡聚透明質(zhì)酸與5-氟尿嘧啶衍生物的結(jié)合常數(shù)分別為5.7847×107和1.3595×107，說明寡聚透明質(zhì)酸與5-氟尿嘧啶衍生物在化學(xué)鍵合的情況下兩者為多位點(diǎn)結(jié)合。
　　4.采用毛細(xì)管電泳峰漂移法對款冬花均一多糖與5-氟尿嘧啶相互作用進(jìn)行了探索。實(shí)驗(yàn)采用水提醇沉法制備得到款冬花各級醇沉粗多糖（TFP、TFP1、

8、TFP2、TFP3），采用DPPH法從分子水平上評價了這三種的抗氧化活性，選用最強(qiáng)氧化活性TFP2進(jìn)一步純化得到3種均一多糖，篩選含糖醛酸量最大為20.16%的TFP2-2進(jìn)行與5-氟尿嘧啶作為研究對象，構(gòu)建款冬花均一多糖與5-氟尿嘧啶及其衍生物相互作用體系，用毛細(xì)管電泳峰漂移模型測試得到了其電泳圖譜，采用Scatchard計(jì)算模型求解結(jié)合常數(shù)。結(jié)果顯示TFP2-2與5-氟尿嘧啶的結(jié)合常數(shù)是9.886×104，相關(guān)系數(shù)良好，兩者為1:1