動力學毛細管電泳新方法的建立及其在相互作用研究中的應用.pdf

1、動力學毛細管電泳(kinetic capillary electrophoresis，KCE)是新發(fā)展起來的用于親和相互作用研究的新方法，相對于傳統(tǒng)的親和方法，KCE集中了均相分析方法的簡單性以及動力學分析方法的動力學特征，可以作為親和測定和親和純化的均相動力學方法的概念平臺。但是傳統(tǒng)KCE在計算方法及實驗操作中都存在一些不足。本文針對傳統(tǒng)KCE的這些不足，發(fā)展了幾種更簡單的KCE新方法，并將KCE的應用拓展到了蛋白及DNA與藥物的相互

2、作用研究中。本文的主要研究內(nèi)容為：
　　 第一部分：測定動力學參數(shù)的平衡混合物的非平衡毛細管電泳(NECEEM)和區(qū)段-區(qū)段動力學毛細管電泳(ppKCE)新方法的建立及應用。在傳統(tǒng)KCE的基礎上，從動力學參數(shù)kon、koff的原理出發(fā)，利用物質(zhì)的峰高表示其濃度，建立了NECEEM及ppKCE測定動力學參數(shù)的新方法，并將這些方法應用到了西酞普蘭與BSA的相互作用研究中。利用NECEEM測得了離解速率常數(shù)koff，并通過考察結合物離

3、解時間與濃度參數(shù)ln(1/hc)之間的線性關系以及實驗方法的精密度、穩(wěn)定性和重現(xiàn)性，驗證了koff求解方法的可靠性。采用建立的ppKCE新方法同時測得了動力學參數(shù)kon和koff以及結合常數(shù)K，測定的結果通過時間比法得到了驗證。
　　 第二部分：校正的預平衡區(qū)帶毛細管電泳(modified pre-eq CZE)新方法的建立及應用。傳統(tǒng)的pre-eq CZE由于電泳中結合物的離解而存在對結合常數(shù)K值測定偏小的缺陷，因此文中將NE

4、CEEM與pre-eq CZE相結合，根據(jù)pre-eq CZE中結合物的離解過程，首先對離解速率常數(shù)koff行了求解，進而利用所求得的koff藥物游離濃度的測定進行校正，建立了modified pre-eq CZE新方法，并將其應用到了西酞普蘭與BSA以及硝基苯胺與鯡魚精DNA間的相互作用研究中，同時將利用modifiedpre-eq CZE求得的結合常數(shù)與毛細管電泳前沿分析法、峰漂移法、紫外-可見吸收光譜法及平衡透析法所得的結果進行了