糖尿病大鼠氧化應(yīng)激及異位脂質(zhì)沉積實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究背景： 糖尿病的根本危害在于其各種并發(fā)癥，糖尿病腎病是糖尿病危害性最大的慢性并發(fā)癥之一。研究糖尿病并發(fā)癥的發(fā)病機(jī)制，具有重要意義。經(jīng)典糖尿病并發(fā)癥的發(fā)病機(jī)制包括：多元醇途徑、糖基化終末產(chǎn)物(AGE)途徑、蛋白激酶C(PKC)激活途徑和己糖胺途徑。Michael Browrllee提出了糖尿病并發(fā)癥的統(tǒng)一機(jī)制學(xué)說(shuō)：上述各經(jīng)典機(jī)制可能均是在高糖情況下，線粒體呼吸鏈中氧自由基生成過(guò)多，即氧化應(yīng)激，所導(dǎo)致的結(jié)果。 氧化應(yīng)

2、激是指機(jī)體中自由基的產(chǎn)生和清除平衡，被一些病理因素(包括促進(jìn)自由基的產(chǎn)生或者抑制自由基清除的多種因素)破壞，引起組織的損傷。正常的機(jī)體組織在代謝反應(yīng)過(guò)程中，可以形成一些自由基，包括0<,2>、H<,2>0<,2>、0H等有害的中間產(chǎn)物，通常這些自由基被稱為活性氧(ROS)；同時(shí)正常機(jī)體組織有多種抗氧化酶和非酶系統(tǒng)，促進(jìn)ROS清除，阻止或限制ROS相關(guān)損傷，維持細(xì)胞正常的代謝活動(dòng)。起主要作用的抗氧化酶包括超氧化物歧化酶(SOD)、過(guò)氧化氫

3、酶(CAT)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)等。 糖尿病個(gè)體中氧化應(yīng)激產(chǎn)生的最根本原因，在于高糖可以引起三羧酸循環(huán)中電子供體生成增多，導(dǎo)致線粒體膜的電位升高，進(jìn)而抑制呼吸鏈中復(fù)合物Ⅲ的作用，延長(zhǎng)輔酶Q半衰期，促進(jìn)了O<,2>向<,2><'->的轉(zhuǎn)化，O<,2><'->生成增多，引發(fā)氧化應(yīng)激。體外實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)用解偶聯(lián)蛋白一1(UCP-1)、錳超氧化物酶(MnSOD)等方法，使線粒體中O<,2><'->一恢復(fù)正常，能夠抑制PK

4、C的激活、AGE的形成和山梨醇的聚積。有關(guān)糖尿病腎病中氧化應(yīng)激發(fā)病機(jī)制的研究國(guó)內(nèi)較少。本實(shí)驗(yàn)采用糖尿病大鼠模型，運(yùn)用RT—PCR、免疫組織化學(xué)、比色法以及形態(tài)學(xué)觀察等方法，觀察研究了氧化應(yīng)激對(duì)糖尿病大鼠腎臟組織的損傷作用。 目的：腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)建立糖尿病大鼠動(dòng)物模型。12周后處死動(dòng)物，觀察各組大鼠腎臟組織的病理學(xué)改變，評(píng)估氧化應(yīng)激產(chǎn)物水平，測(cè)定各種抗氧化酶活性和基因表達(dá)情況以及硝基酪氨酸(NT)的表達(dá)情況。

5、 方法：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為三組：正常對(duì)照組(NC組)、糖尿病組(D Ⅰ組)、胰島素治療組(DⅡ組)。糖尿病大鼠按照60mg/Kg體重的劑量，一次性腹腔注射STZ檸檬酸溶液進(jìn)行造模。D Ⅰ組給予PZI 2U-4U/2日，DⅡ組則每日給予PZI 9-12U/Kg體重。運(yùn)用比色法測(cè)定脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)水平、TSOD、Cu-ZnSOD、Mn SOD、CAT、GSG-Px等各抗氧化酶的活性，RT-PCR方法測(cè)定各抗氧化酶的基因表達(dá)情況；免

6、疫組織化學(xué)方法觀察硝基酪氨酸(NT)在各組織中的表達(dá)情況； HE染色和PAS染色觀察糖尿病大鼠腎臟病理改變。 結(jié)果： 1)一般指標(biāo)：12周后，NC組和DⅡ組大鼠體重較0周增加，D Ⅰ組則明顯下降；血糖、糖化血紅蛋白(HbAlc)、膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)在DⅠ組較NC組或DⅡ組明顯升高，DⅡ組與NC組間無(wú)顯著性差異。 2)DⅠ組較NC組和DⅡ組尿蛋白含量升高，肌酐清除率下降。 3) 氧化應(yīng)

7、激水平：D Ⅰ組較NC組和DⅡ組MDA水平顯著升高，總抗氧化能力下降：抗氧化酶中，TSOD、Cu-Zn SOD、CAT活性明顯下降，GSH-Px活性明顯升高，MnSOD活性在各組無(wú)差異；各抗氧化酶的基因表達(dá)檢測(cè)中，Cu-Zn SOD、GSH-Px的mRNA表達(dá)水平在DⅠ組較NC組和DⅡ組明顯升高，而CAT的mRNA表達(dá)水平則下降，Mn SOD mRNA表達(dá)水平在各組水平無(wú)差異；NT在DⅠ組的表達(dá)明顯強(qiáng)于NC組和DⅡ組。 4)