脂聯(lián)素對2型糖尿病大鼠骨髓微環(huán)境氧化應(yīng)激水平及骨吸收影響的實驗研究.pdf

1、目的：
　　通過探討脂聯(lián)素對2型糖尿病(T2DM)大鼠骨髓中抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、骨保護(hù)素（OPG）與NF-κB受體活化配體(RANKL)表達(dá)水平的影響，結(jié)合脂聯(lián)素對骨髓微環(huán)境中糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)及晚期氧化蛋白產(chǎn)物（AOPP）的影響，探討脂聯(lián)素是否可以通過調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激水平對糖尿病骨代謝起一定的作用。
　　方法：
　　60只清潔級6周齡雄性SD大鼠隨機分為正常對照組（N組,n=18)及2型糖尿病模型組4

2、2只。正常對照組予普通飼料喂養(yǎng)，2型糖尿病模型組先以高脂高糖飼料喂養(yǎng)8周，隨后按體重給予以一次性腹腔注射濃度為1％的鏈脲佐菌素（STZ）30mg/kg，以建立2型糖尿病大鼠模型。于建模成功后，選取造模成功的 SD大鼠36只，隨機分為糖尿病組（DM組，n=18）及糖尿病脂聯(lián)素干預(yù)組（APN，n=18）， APN組予皮下注射脂聯(lián)素10μg/kg·d干預(yù)，普通組及糖尿病組大鼠給予等量生理鹽水。分別于干預(yù)后第4、8、12周末隨機選取6只符合標(biāo)準(zhǔn)

3、的大鼠，麻醉后迅速取出雙側(cè)股骨及脛骨，提取一側(cè)股骨及脛骨骨髓液，經(jīng)離心分別留取骨髓細(xì)胞及骨髓上清液，另一側(cè)股骨測定骨密度后脫鈣包埋切片。ELISA、RT-PCR等方法檢測TRAP、RANKL、OPG、AOPP、AGEs，骨組織HE染色觀察骨小梁密度。
　　結(jié)果：
　　1.隨著飼養(yǎng)時間的延長，可見糖尿病組大鼠血糖水平明顯升高，而脂聯(lián)素干預(yù)組大鼠血糖水平較糖尿病組大鼠低（P<0.05）。
　　2.隨飼養(yǎng)時間延長，正常對照組

4、大鼠骨組織免疫組化表達(dá)AGEs水平無明顯變化， DM組及APN組大鼠骨組織AGEs逐漸升高；三組間比較表明，4周時，DM組大鼠較N組大鼠AGEs水平明顯升高(P<0.05)，脂聯(lián)素干預(yù)后，APN組大鼠較DM組明顯減低，8周及12周時，DM組AGEs表達(dá)升高更顯著（P<0.05），APN干預(yù)后較DM組降低（P<0.05），且12周較8周兩組間AGEs下降幅度顯著增大。
　　3.隨著飼養(yǎng)時間延長，N組大鼠骨髓上清液中AOPP無明顯變化

5、，TRAP水平逐漸升高，DM組及APN組大鼠AOPP及TRAP水平均逐漸升高；4周時，三組大鼠TRAP表達(dá)水平無明顯差異，DM組較N組大鼠AOPP水平明顯升高（P<0.05）， APN組較DM組無明顯差異。8周時，與N組比較，DM組T2DM大鼠AOPP及TRAP水平明顯升高（P<0.05），APN組大鼠骨髓上清液 AOPP及 TRAP水平較DM組明顯降低（P<0.05），12周時，兩組間AOPP及TRAP下降幅度增大（P<0.05）。<

6、br>　　4.隨著喂養(yǎng)時間延長，各組大鼠骨髓細(xì)胞中 OPG mRNA表達(dá)水平呈逐漸降低趨勢，RANKL mRNA表達(dá)水平呈逐漸增高趨勢。4周時，三組大鼠OPG mRNA、RANKL mRNA表達(dá)水平無明顯差異，8周時，與N組比較，DM組大鼠骨髓細(xì)胞OPG mRNA表達(dá)水平顯著降低，RANKL mRNA表達(dá)水平顯著升高(P<0.05)，脂聯(lián)素干預(yù)后，APN組大鼠骨髓細(xì)胞OPG mRNA表達(dá)水平較DM組明顯升高，RANKL mRNA表達(dá)水平

7、較 DM組顯著降低，12周時，兩組間比較變化幅度更加明顯。OPG/RANKL值與OPG mRNA表達(dá)水平變化趨勢一致(P<0.001)。
　　5.隨著時間延長，各組大鼠股骨頸 BMD指標(biāo)均逐漸減低，以 DM組明顯；4周時，三組大鼠BMD無明顯差異，骨小梁結(jié)構(gòu)尚無明顯變化，12周時，DM組較N組BMD水平明顯減低，骨小梁破壞嚴(yán)重，APN組較DM組BMD水平明顯升高，骨小梁結(jié)構(gòu)有所改善(P<0.001)。
　　結(jié)論：
　　

8、1.2型糖尿病大鼠糖代謝紊亂致骨髓微環(huán)境中糖基化終末產(chǎn)物生成增多，氧化應(yīng)激程度加重，可能使2型糖尿病大鼠破骨細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中OPG/RANKL比值降低，結(jié)合TRAP顯著升高，表明破骨細(xì)胞分化生成增多，可促進(jìn)骨吸收過程，破壞骨小梁，影響骨質(zhì)量及骨密度，加速骨丟失。
　　2.外源性脂聯(lián)素可能通過減少AGEs的生成，使糖尿病大鼠骨髓微環(huán)境中氧化應(yīng)激水平降低，升高OPG表達(dá)，抑制RANKL表達(dá)，降低2型糖尿病大鼠骨髓中破骨細(xì)胞分化，從而