脂聯(lián)素對(duì)高糖環(huán)境下HCM氧化應(yīng)激及凋亡的影響.pdf

1、目的：
　　 通過(guò)高糖環(huán)境培養(yǎng)人心肌細(xì)胞(Human Cardiac Myocytes，HCM)建立心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激模型，觀察脂聯(lián)素(adiponectin，ADPN)對(duì)心肌細(xì)胞各氧化應(yīng)激指標(biāo)SOD、MDA、P66Shc、HO-1及凋亡的影響，從而揭示脂聯(lián)素對(duì)人心肌細(xì)胞的可能保護(hù)機(jī)制。
　　 方法：
　　 ①將體外培養(yǎng)的人心肌細(xì)胞隨機(jī)分為三組：對(duì)照組（5.5mmol/L D-葡萄糖，N組）、高糖組（30mmol/

2、L D-葡萄糖，G組）、高糖+脂聯(lián)素組（30mmol/L D-葡萄糖+2.5ug/mlADPN，A組）。②按上述條件分別干預(yù)24h、48h、72h。③采用黃嘌呤氧化酶法檢測(cè)在不同時(shí)間點(diǎn)各組細(xì)胞的光吸收值（OD值），檢測(cè)高糖及脂聯(lián)素對(duì)人心肌細(xì)胞超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase，SOD)活力的影響。④用代巴比妥酸法測(cè)在不同時(shí)間點(diǎn)各組細(xì)胞的光吸收值（OD值），檢測(cè)高糖及脂聯(lián)素對(duì)人心肌細(xì)胞丙二醛(malondialdeh

3、yde，MDA)含量的影響。⑤提取各組細(xì)胞的總RNA，逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，然后加入引物及SYBR綠色熒光，通過(guò)熒光定量PCR法(Real-Time PCR)測(cè)定銜接蛋白(adaptin P66Shc)，血紅素加氧酶-1(heme oxygenase-1，HO-1)在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)上的表達(dá)。⑥采用AnnexinV-FITC/PI雙標(biāo)記染色法用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)在不同時(shí)間點(diǎn)各心肌細(xì)胞的凋亡率。
　　 結(jié)果：
　　 與對(duì)照組相比，高糖

4、組SOD含量顯著下降，MDA含量顯著上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，與高糖組相比，脂聯(lián)素組SOD含量顯著上升，MDA含量顯著下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。與對(duì)照組相比，高糖組HO-1 mRNA表達(dá)增高；脂聯(lián)素組較高糖組表達(dá)亦增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。與對(duì)照組相比，高糖組P66Shc mRNA表達(dá)增高；脂聯(lián)素組較高糖組表達(dá)降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。高糖組細(xì)胞凋亡率較對(duì)照組明顯增加，而脂聯(lián)素組細(xì)