脂聯(lián)素對(duì)高糖環(huán)境下人心肌細(xì)胞凋亡及Bax、Bcl-2表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　 通過(guò)培養(yǎng)人心肌細(xì)胞株，觀察高糖環(huán)境下及加入外源脂聯(lián)素干預(yù)后不同時(shí)間點(diǎn)，人心肌細(xì)胞的增殖、凋亡情況，及Bax\Bcl-2mRNA的表達(dá)變化，從而揭示脂聯(lián)素對(duì)高糖環(huán)境下心肌細(xì)胞的保護(hù)作用，為臨床糖尿病心肌病的治療提供新的思路。
　　 方法：
　　 ①將培養(yǎng)的人心肌細(xì)胞(HCM)隨機(jī)分為正常對(duì)照組(D-葡萄糖濃度：5.5mmol/l)、高糖組（D-葡萄糖濃度：30.0mmol/l）、高糖+脂聯(lián)素組（D-葡

2、萄糖濃度：30.0mmol/l+ADPN濃度：2.5μg/ml），按上述條件分別培養(yǎng)24h、48h、72h；
　　 ②運(yùn)用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法測(cè)定不同時(shí)間點(diǎn)各組細(xì)胞的光吸收值（OD值），檢測(cè)高糖及脂聯(lián)素對(duì)人心肌細(xì)胞增殖的影響；
　　 ③收集各個(gè)時(shí)間段培養(yǎng)的人心肌細(xì)胞，離心后加入脂結(jié)合蛋白AnnexinV/碘化丙啶(PI)染色后，運(yùn)用流式細(xì)胞儀(FCM)測(cè)定各組細(xì)胞在不同時(shí)間段的凋亡率；
　　 ④在各個(gè)時(shí)間段

3、提取各組人心肌細(xì)胞的RNA，逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，然后加入引物，通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-PCR)技術(shù)測(cè)定各組人心肌細(xì)胞Bax、Bcl-2的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：
　　 ①與正常對(duì)照組相比，高糖的持續(xù)作用抑制人心肌細(xì)胞增殖，而脂聯(lián)素組人心肌細(xì)胞的增殖明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；
　　 ②高糖組與對(duì)照組相比，明顯增加了人心肌細(xì)胞的凋亡率，加入脂聯(lián)素干預(yù)后，人心肌細(xì)胞的凋亡率明顯下降，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)

4、意義(P＜0.05)；
　　 ③高糖組人心肌細(xì)胞Bax的表達(dá)上調(diào)、Bcl-2的表達(dá)下降；與對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。脂聯(lián)素組人心肌細(xì)胞Bax的表達(dá)減少、Bcl-2的表達(dá)增加，且該作用呈時(shí)間依賴性，與高糖組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 高糖環(huán)境下，人心肌細(xì)胞的增殖減少，凋亡率增加，Bax的表達(dá)增加，Bcl-2表達(dá)降低；而加入脂聯(lián)素干預(yù)后，通過(guò)下調(diào)促進(jìn)凋亡因子Bax的表達(dá)、上調(diào)抑制