脂聯(lián)素對(duì)高糖環(huán)境下人腎小管上皮細(xì)胞凋亡及氧化應(yīng)激水平的影響.pdf

1、目的:通過(guò)體外高糖環(huán)境下培養(yǎng)人近曲腎小管上皮細(xì)胞(HK-2細(xì)胞)探討脂聯(lián)素(adiponectin，ADPN)對(duì)人近曲腎小管上皮細(xì)胞凋亡及氧化應(yīng)激各項(xiàng)指標(biāo)MDA含量、SOD活性以及p66Shc mRNA、HO-1 mRNA表達(dá)水平的影響，以揭示脂聯(lián)素對(duì)糖尿病腎病的保護(hù)機(jī)制。
　　 方法:①將體外培養(yǎng)人近曲腎小管上皮細(xì)胞(HK-2細(xì)胞)在正常對(duì)照組（5.5mmol/L D-葡萄糖）、高糖組(30.0mmol/L D-葡萄糖)、脂聯(lián)

2、素組(30.0mmol/LD-葡萄糖+2.5μg/ml ADPN)中分別培養(yǎng)24h，48h，72h后，采用AnnexinV-FITC/PI雙標(biāo)記染色法使用流式細(xì)胞儀測(cè)定HK-2細(xì)胞在不同時(shí)間點(diǎn)的凋亡率。②將體外培養(yǎng)人近曲腎小管上皮細(xì)胞在正常對(duì)照組（5.5mmol/L D-葡萄糖）、高糖組(30.0mmol/L D-葡萄糖)、脂聯(lián)素組(30.0mmol/L D-葡萄糖+2.5μg/ml ADPN)中分別培養(yǎng)24h，48h，72h后取培養(yǎng)液

3、，運(yùn)用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定HK-2細(xì)胞培養(yǎng)液中在不同時(shí)間點(diǎn)的超氧化物歧化酶(SOD)活性，運(yùn)用硫代巴比妥酸法測(cè)定HK-2細(xì)胞培養(yǎng)液中在不同時(shí)間點(diǎn)的丙二醛(MDA)含量。③將體外培養(yǎng)人近曲腎小管上皮細(xì)胞在正常對(duì)照組（5.5mmol/L D-葡萄糖）、高糖組(30.0mmol/L D-葡萄糖)、脂聯(lián)素組(30.0mmol/L D-葡萄糖+2.5μg/ml ADPN)中分別培養(yǎng)24h，48h，72h后，運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-PCR)測(cè)定

4、HK-2細(xì)胞在不同時(shí)間點(diǎn)的血紅素加氧酶-1(HO-1)及銜接蛋白p66Shc mRNA表達(dá)水平。
　　 結(jié)果:①與正常對(duì)照組相比，高糖組人近曲腎小管上皮細(xì)胞凋亡率顯著增高，加入脂聯(lián)素(2.5μg/ml)后細(xì)胞凋亡明顯受到抑制，并呈時(shí)間依賴性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。②與正常對(duì)照組相比，高糖組人近曲腎小管上皮細(xì)胞培養(yǎng)液內(nèi)SOD活性下降，MDA含量增高，加入脂聯(lián)素(2.5μg/ml)后SOD活性增高，MDA含量降低，亦呈時(shí)

5、間依賴性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。③與正常對(duì)照組相比，高糖組誘導(dǎo)人近曲腎小管上皮細(xì)胞HO-1及銜接蛋白p66Shc mRNA表達(dá)上調(diào)，加入脂聯(lián)素(2.5μg/ml)后HO-1 mRNA表達(dá)進(jìn)一步增強(qiáng)，而p66Shc mRNA表達(dá)降低，且呈時(shí)間依賴性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　 結(jié)論:高糖環(huán)境下隨時(shí)間延長(zhǎng)，人近曲腎小管上皮細(xì)胞凋亡率明顯增加，而脂聯(lián)素干預(yù)后可延緩細(xì)胞凋亡。高糖環(huán)境下隨時(shí)間延長(zhǎng)，細(xì)胞培養(yǎng)液及細(xì)