藥用真菌豬苓He-Ne激光及紫外線誘變育種的研究.pdf

1、該文以藥用真菌豬苓為研究對(duì)象,采用He-Ne激光及紫外線兩種誘變處理對(duì)豬苓出發(fā)菌株菌絲體進(jìn)行了單一誘變劑誘變和復(fù)合誘變.通過測(cè)量誘變菌落直徑初步確定菌絲生長速率,從各單一誘變劑誘變和復(fù)合誘變中均獲得的生長速率不同程度提高的變異菌株.對(duì)于初步篩選的變異菌株L3-7、U1-7、LU-7,測(cè)量了液體培養(yǎng)條件下的菌絲干重生長曲線、胞外粗多糖的動(dòng)態(tài)積累、三種與碳素營養(yǎng)相關(guān)的酶的活性變化情況,從而進(jìn)一步篩選出了生長量和胞外粗多糖產(chǎn)量均比出發(fā)菌株有顯

2、著提高的優(yōu)勢(shì)變異菌株LU-7.該菌株經(jīng)酯酶同工酶譜分析,酶帶條數(shù)和Rf值均發(fā)生了顯著變化,同時(shí)通過傳代穩(wěn)定性試驗(yàn)分析,都表明該菌株遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變且遺傳穩(wěn)定性好.對(duì)菌株LU-7的液體培養(yǎng)基進(jìn)行了優(yōu)化,包括碳源、氮源以及無機(jī)元素,還發(fā)現(xiàn)附加一定量的青岡木煮液,能明顯提高菌絲生長速度和胞外多糖積累.同時(shí)優(yōu)化了部分優(yōu)勢(shì)變異菌株的培養(yǎng)條件.菌株LU-7在經(jīng)篩選的優(yōu)化培養(yǎng)基上生長的最大菌絲體干重為165.5mg/30ml,比在基本培養(yǎng)基上生長的

3、出發(fā)菌株高出了74.9％.LU-7在第11天達(dá)到產(chǎn)糖高峰期,為5.42mg/ml,比出發(fā)菌株的2.78mg/ml提高了95.0%.LU-7菌絲發(fā)酵濾液經(jīng)Sevag法除蛋白,減壓濃縮,95%乙醇沉淀,丙酮、乙醚洗滌等步驟獲得了粗品胞外多糖,再經(jīng)葡聚糖凝膠柱層析獲得純品多糖.采用薄層層析和紙層析分析了該菌株與出發(fā)菌株純品多糖酸水解的單糖組成,發(fā)現(xiàn)其單糖組分都是以甘露糖為主.同時(shí)還對(duì)比了兩者的紅外光圖譜,兩者具有相同的特征吸收峰.說明優(yōu)勢(shì)變異