人肺腺癌多藥耐藥細胞差異表達基因的克隆與初步鑒定.pdf

1、該研究采用大劑量沖擊和逐步增加劑量相結(jié)合的方式,以順鉑為誘導(dǎo)藥物,人肺腺癌細胞系SPC-A-1為誘導(dǎo)對象,經(jīng)過192d的誘導(dǎo),建立了人肺腺癌多藥耐藥細胞系SPC-A-1/CDDP.MTT結(jié)果表明該細胞系對順鉑、5-氟尿嘧啶、絲裂霉素、長春新堿、和足葉乙甙等藥物有不同程度的耐藥性.生長曲線、倍增時間、形態(tài)學(xué)和常規(guī)染色體檢測顯示SPC-A-1/CDDP細胞性狀穩(wěn)定,是可靠的人肺腺癌多藥耐藥細胞系,可應(yīng)用于下游實驗,同時提示大劑量沖擊和逐步增

2、加劑量相結(jié)合可縮短藥物誘導(dǎo)時間.在成功誘導(dǎo)建立肺腺癌多藥耐藥細胞系的基礎(chǔ)上,應(yīng)用抑制消減雜交(SSH),以肺腺癌多藥耐藥細胞SPC-1-A/CDDP cDNA為實驗方(Tester),以肺腺癌細胞SPC-1-A cDNA為對照方(Driver),結(jié)合T/A克隆技術(shù)構(gòu)建了肺腺癌多藥耐藥細胞差異表達消減cDNA文庫,經(jīng)斑點雜交篩選獲得21個SPC-A-1/CDDP細胞差異表達cDNA片段.研究表明SSH技術(shù)是篩選新基因的有效方法,2個新的c