腫瘤抑制基因XAF1在耐藥肺腺癌細胞中表達的初步研究.pdf

1、目的：研究腫瘤抑制基因XAF1在耐藥肺腺癌中的表達，探討XAF1在肺腺癌耐藥發(fā)生、發(fā)展中的作用，為基因治療耐藥肺腺癌提供理論依據(jù)。
　　 方法：本研究培養(yǎng)人非小細胞肺癌順鉑耐藥細胞株A549/DDP和其親本株A549，通過MTT法測定A549/DDP對順鉑的耐藥指數(shù)；采用半定量逆轉錄．聚合酶鏈式反應(RT．PCR)檢測兩種細胞及凋亡細胞中XAF1、XIAPmRNA的表達水平變化：利用重組腺病毒Ad5/F35-XAF1介導轉染人肺

2、腺癌順鉑耐藥細胞株A549/DDP，通過流式細胞計量法分別檢測轉染前后肺癌細胞生長和凋亡變化；采用RT-PCR定性檢測細胞轉染后XAF1mRNA表達變化。
　　 結果：(1)A549和A549/DDP細胞對順鉑的IC50分別為5.52±0.12μmol/L、34.96±0.74mol/L，因此，A549/DDP對順鉑的耐藥指數(shù)為34.96/5.52=6.33，確定為耐順鉑的非小細胞肺癌細胞；(2)RT-PCR結果顯示A549/D

3、DP細胞較正常A549細胞XAF1mRNA表達水平下調(P＜0.05)，正常A549細胞組較順鉑作用48h后的A549細胞（即凋亡細胞）XAF1mRNA表達水平下調(P＜0.05)；XIAPmRNA的表達A549/DDP細胞組明顯高于順鉑作用后的A549細胞(P＜0.01)，且A549/DDP細胞組XIAPmRNA的表達高于正常A549細胞組(P＜0.05)，正常A549細胞組XIAPmRNA的表達高于順鉑作用后的A549細胞(P＜0.

4、05)；(3)A549/DDP細胞在經(jīng)重組腺病毒Ad5/F35-XAF1轉染后，在安全滴度范圍內細胞的凋亡隨滴度的增加而增強，且XAF1mRNA表達增強，且隨劑量依賴性增強(P＜0.05)。
　　 結論：
　　 (1)本研究結果表明，順鉑耐藥肺腺癌細胞株中腫瘤抑制基因XAF1表達降低或缺如，XIAP基因表達明顯增強，XAF1、XIAP作為凋亡相關基因現(xiàn)已被肯定，XAF1在肺腺癌順鉑耐藥過程的發(fā)生、發(fā)展中可能起一定作用。<

5、br>　　 (2)重組腺病毒Ad5/F35-XAF1及對照腺病毒Ad5/F35-EGFP，可成功對肺腺癌順鉑耐藥細胞株進行瞬時轉染，檢測耐藥肺腺癌細胞中XAF1mRNA表達較轉染前明顯增強，可見重組腺病毒適用于順鉑耐藥肺腺癌的基因治療。
　　 (3)本研究結果顯示，采用穩(wěn)定表達XAF1的腺病毒載體轉染順鉑耐藥肺腺癌細胞，可抑制細胞增殖和誘導細胞凋亡，其機制可能與XAF1恢復表達后重新激活了其參與的凋亡通路途徑有關，說明XAF1