XAF1基因的表達及其在胃腸腫瘤中的作用研究.pdf

1、目的:該文對XAF1在胃、腸道腫瘤中的表達和轉(zhuǎn)錄抑制的機制進行了初步的研究.同時通過研究XAF1基因在體內(nèi)、外對胃、腸腫瘤細胞的生長抑制和凋亡誘導(dǎo)作用,以期探索為腫瘤治療提供一個新的手段.方法 1.搜索了XAF1基因組DNA的全長序列,確定了包含有外顯子1的CpG島1為研究的靶點,通過甲基化特異性PCR技術(shù)和重亞硫酸鹽修飾的BSP測序技術(shù),對6種胃、腸腫瘤細胞株和部分胃、腸腫瘤/正常組織標本進行了XAF1的表達和甲基化狀態(tài)的研究.2.利

2、用熒光素酶報告分析系統(tǒng),檢測了CpG島1的相關(guān)基因片段的潛在增強子活性.3.通過分子克隆技術(shù)構(gòu)建含有正、反義XAF1基因片段的克隆載體,轉(zhuǎn)染胃、腸腫瘤細胞株.分別用RT-PCR、流式細胞術(shù)、細胞生長實驗等方法檢測轉(zhuǎn)染XAF1后的細胞生長、基因表達和凋亡情況,以及過度表達XAF1與部分抗腫瘤藥物的協(xié)同作用.4.構(gòu)建胃、腸腫瘤的小鼠移植瘤模型.利用基因治療技術(shù)觀察XAF1在體內(nèi)對腫瘤生長和凋亡的影響.結(jié)論 1.XAF1基因的高甲基化狀態(tài)是X