癌基因DJ-1在胃癌干細(xì)胞中的表達(dá)及其作用研究.pdf

1、目的：
　　研究癌基因DJ-1在胃癌干細(xì)胞(GCSC)中的表達(dá)情況及其腫瘤干細(xì)胞特性。
　　方法：
　　懸浮培養(yǎng)法富集胃癌干細(xì)胞，利用RT-PCR檢測(cè)DJ-1的表達(dá)量，從胃正常細(xì)胞中克隆出DJ-1基因，通過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)構(gòu)建并篩選過(guò)表達(dá)DJ-1的胃癌干細(xì)胞（pLV-DJ-1組）及干擾表達(dá)的胃癌干細(xì)胞（siDJ-1組）。采用RT-PCR和Western blot技術(shù)檢測(cè)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染DJ-1胃癌干細(xì)胞中DJ-1 mRNA和蛋白

2、質(zhì)表達(dá)量，并比較其與空載體組和空白對(duì)照組的差異；通過(guò)MTS法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后胃癌干細(xì)胞生存及生長(zhǎng)情況，并繪制生長(zhǎng)曲線比較轉(zhuǎn)染后干細(xì)胞增殖變化；運(yùn)用單因素方差分析比較轉(zhuǎn)染后細(xì)胞成瘤能力。
　　結(jié)果：
　　(1)癌基因DJ-1在胃癌MGC-803細(xì)胞中表達(dá)量最高。
　?。?）DJ-1在胃癌干細(xì)胞中高表達(dá)。
　　（3）過(guò)表達(dá)DJ-1重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染胃癌干細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)組（pLV-DJ-1組）胃癌干細(xì)胞DJ-1 mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)量

3、升高；干擾DJ-1重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染胃癌干細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)組（siDJ-1組）胃癌干細(xì)胞DJ-1 mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)量下降。
　?。?）過(guò)表達(dá)DJ-1組細(xì)胞增殖能力增強(qiáng)；干擾表達(dá)DJ-1組細(xì)胞增殖能力減弱。
　　(5)pLV-DJ-1組細(xì)胞自我更新速率加快，成瘤能力增強(qiáng)，pLV-DJ-1組與空載體組成瘤率之比為30.53％±0.82% vs15.8%±0.52%，P＜0.001；siDJ-1組細(xì)胞增殖速率減慢，成瘤能力降低，siDJ-