DJ-1和PTEN在慢性腎臟病腎小管間質(zhì)病變中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的:
　　 慢性腎臟病(chronic kidney disease,CKD)的發(fā)病率每年都以7％的速度增加,其最終結(jié)局將發(fā)展為終末期腎臟病(end stage renal disease,ESRD)。很多研究都集中在腎小球硬化、纖維化等病變上,不可忽略的是腎小管間質(zhì)病變在腎功能的進(jìn)行性損害過程中也起到了非常重要的作用。因此在積極治療腎小球病變的同時(shí)如何延緩甚至阻止腎小管間質(zhì)病變的發(fā)展成了慢性腎臟病治療的又一主題。本實(shí)驗(yàn)旨在研

2、究促纖維化因子重組人帕金森病蛋白7(Parkinson'sdisease7,Park7,DJ-1)和抗纖維化因子染色體10上缺失的磷酸酶與張力蛋白同源物基因(Phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)在原發(fā)性慢性腎臟病患者腎組織中的表達(dá)及意義。分析其表達(dá)相關(guān)性,并通過分析二者與臨床、實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)、腎臟病理改變的關(guān)系,初步探討DJ-1、PTEN在CKD腎小管間

3、質(zhì)病變中的作用,為慢性腎臟病的發(fā)病機(jī)制及治療提供有力證據(jù)。
　　 方法:
　　 選擇2010年12月至2011年4月期間就診于濟(jì)南軍區(qū)總醫(yī)院腎內(nèi)科、并通過腎活檢(光鏡、免疫熒光、電鏡)和臨床資料確診的原發(fā)性慢性腎臟病患者45例,其中男性25例,女性20例。具體臨床診斷包括慢性腎炎30例、腎病綜合征12例、隱匿性腎小球腎炎3例。排除繼發(fā)性慢性腎臟病:糖尿病腎病、紫癜性腎炎、乙肝相關(guān)性腎炎、狼瘡性腎炎、淀粉樣變腎病、藥物性腎

4、損害等。收集患者一般情況:平均年齡、平均病程。觀察并記錄患者腎活檢術(shù)前各項(xiàng)臨床指標(biāo):收縮壓、舒張壓、血紅蛋白、24小時(shí)尿蛋白定量、血清白蛋白、血清球蛋白、膽固醇、甘油三酯、肌酐、尿素氮、血尿酸、尿比重、尿滲透壓等,并用簡化MDRD公式[1]估測患者的腎小球?yàn)V過率(GFR)?；颊吣I活檢組織分成三部分,一部分做冰凍切片,在IgA、IgG、IgM、C3、C1q、FRA、HBsAg、HbcAg等免疫熒光染色的基礎(chǔ)上,行DJ-1、PTEN兩因子免

5、疫熒光染色。采用免疫熒光三步法檢測DJ-1(FITC標(biāo)記)、PTEN(Cy3標(biāo)記)在腎組織中的表達(dá),并用圖像分析軟件(青島美迪新技術(shù)公司)對免疫熒光強(qiáng)度表達(dá)做平均值半定量。一部分做石蠟切片,常規(guī)行蘇木素-伊紅(HE)、高碘酸.席夫氏(PAS)、六胺銀(PASM)、MASSON三色染色,觀察光鏡下腎組織病理改變。另有部分組織行電鏡檢查。根據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO1995年)腎臟病組織學(xué)分類標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行病理分型。腎小管各項(xiàng)病理參數(shù)的半定量積分采用

6、Katafuchi等[2]的標(biāo)準(zhǔn)分級。根據(jù)腎小管間質(zhì)損害程度分為Ⅰ組(0分);Ⅱ組(1-3分);Ⅲ組(4-6分)和Ⅳ組(7-9分)。采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件對資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理、分析,檢測結(jié)果以(x)±s表示,P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1、患者平均年齡(43.37±15.72)歲,平均病程(19.65±33.83)月,平均收縮壓(133.17±21.75)mmHg,平均舒張壓(85.17±

7、11.33)mmHg,腎小管積分(3.667±2.63),腎小球?yàn)V過率(75.71±50.68),血肌酐(169.10±85.34),尿素氮(8.31±5.46),血尿酸(354.23±127.98),血清白蛋白(31.11±9.007),血清球蛋白(26.24±7.03),膽固醇(6.57±2.62),甘油三酯(2.24±1.18),血紅蛋白(125.20±20.66),尿比重(1.0163±0.0126),尿滲透壓(689.33±2

8、35.76),24小時(shí)尿蛋白定量(4.60±6.23)。
　　 2、45例患者腎臟病理分型包括:1)系膜增生性腎小球腎炎20例:輕度6例、中度11例、重度3例;2)膜性腎病6例:Ⅰ期1例、Ⅱ期3例、Ⅲ期2例;3)IgA腎病12例:Ⅱ級1例、Ⅲ級3例、Ⅳ級5例、Ⅴ級3例;4)局灶節(jié)段性腎小球硬化癥3例;5)膜增生性腎小球腎炎4例。腎小管間質(zhì)積分(3.667±2.63),根據(jù)積分分成4組:Ⅰ組(9例);Ⅱ組(15例);Ⅲ組(11例)

9、和Ⅳ組(10例)。
　　 3、DJ-1在4組患者腎組織中主要表達(dá)于腎小管上皮細(xì)胞胞漿,并隨著腎小管間質(zhì)病變程度的加重表達(dá)量逐漸增多,組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。與腎小球?yàn)V過率、尿滲透壓呈負(fù)相關(guān)(P＜0.05);與患者腎小管間質(zhì)病變積分、血肌酐、尿素氮呈正相關(guān)(P＜0.05)。
　　 4、PTEN在Ⅰ組患者腎組織中廣泛、大量表達(dá)于腎小管上皮細(xì)胞胞漿,但隨著腎小管間質(zhì)病交程度的加重,在其余3組表達(dá)量逐漸減少,組間

10、差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。并且與腎小球?yàn)V過率、尿滲透壓成正相關(guān)(P＜0.05);與腎小管間質(zhì)病變積分、血肌酐、尿素氮之間存在明顯負(fù)相關(guān)(P＜0.05)。
　　 5、DJ-1、PTEN二者在各組患者腎組織中的表達(dá)量呈相反趨勢,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.823,P＜0.01)。
　　 結(jié)論:
　　 1、DJ-1在各組原發(fā)性慢性腎臟病患者腎組織中有不同程度的表達(dá),隨著腎小管間質(zhì)纖維化程度的加重而表達(dá)增

11、多,組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。并與腎小球?yàn)V過率、尿滲透壓呈顯著負(fù)相關(guān),與腎小管積分、血肌酐呈顯著正相關(guān)。提示DJ-1與腎臟纖維化密切相關(guān),可能存在促腎小管間質(zhì)纖維化作用。
　　 2、PTEN在各組原發(fā)性慢性腎臟病患者腎組織中有不同程度的表達(dá),隨著腎小管間質(zhì)纖維化程度的加重而表達(dá)減少,組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與腎小球?yàn)V過率、尿滲透壓呈顯著正相關(guān),與腎小管積分、血肌酐呈顯著負(fù)相關(guān)。提示PTEN與腎臟纖維化密切相關(guān),可能存在抑制腎小管間質(zhì)纖