mTORC1在慢性腎臟病胰島素抵抗中的作用.pdf

1、目的：
　　代謝綜合征(MetS)在慢性腎臟病(CKD)患者中普遍存在，與CKD預(yù)后密切相關(guān)。胰島素抵抗(IR)作為MetS的基礎(chǔ)，是非糖尿病CKD患者疾病進(jìn)展的獨(dú)立危險因素。而哺乳動物雷帕霉素靶蛋白復(fù)合物1(mTORC1)信號通路可感受多種環(huán)境變化調(diào)節(jié)機(jī)體的生長代謝穩(wěn)態(tài)，參與腫瘤、肥胖、2型糖尿病等多種疾病發(fā)生發(fā)展過程。過量的氨基酸、葡萄糖等引起mTORC1信號通路的過度激活，通過負(fù)反饋?zhàn)饔茫种埔葝u素信號通路，被認(rèn)為是2型糖尿

2、病IR的重要機(jī)制之一。但在CKD疾病狀態(tài)下，mTORC1表達(dá)與IR的關(guān)系尚不十分清楚。因此，本實(shí)驗旨在研究慢性腎臟病動物模型即5/6腎切除大鼠，發(fā)生IR狀態(tài)下，mTORC1信號通路在脂肪、肌肉、肝臟組織中的變化，及其血清刺激肌肉細(xì)胞、脂肪細(xì)胞所產(chǎn)生的IR及與mTORC1的關(guān)系。初步探討CKD疾病狀態(tài)下mTORC1與IR的關(guān)系。
　　方法：
　　1、建立慢性腎臟疾病大鼠模型，即進(jìn)行5/6腎切除手術(shù)（CKD組），即先進(jìn)行左腎的2

3、/3切除，一周以后摘除右腎，對照組同期行腎臟被膜剝離手術(shù)，以二次手術(shù)后時間為起始點(diǎn)，飼養(yǎng)20周;
　　2、禁食水12小時后行腹腔注射糖耐量試驗(IPGTT)，即按2g/Kg葡萄糖行腹腔葡萄糖注射，分別測0分、30分、60分、90分、120分血糖值，并通過曲線下面積統(tǒng)計手術(shù)組與對照組差異;繼續(xù)飼養(yǎng)2天后，麻醉下下腔靜脈取血處死，取腓腸肌組織、附睪脂肪組織、肝臟組織液氮冰凍，-80℃保存;
　　3、檢測血清生化及24h尿變化，E

4、LISA法檢測空腹胰島素，穩(wěn)態(tài)模式評估法(HOMA-IR)檢測胰島素敏感性，Western blotting方法檢測手術(shù)組與對照組脂肪、肌肉、肝臟組織中胰島素信號通路蛋白p-y-IRS1、p-AKT及mTORC1信號通路關(guān)鍵因子p-mTOR、p-p70s6k表達(dá)差異;
　　4、采用C2C12細(xì)胞模型及3T3L1細(xì)胞模型，分別誘導(dǎo)為成熟的肌肉細(xì)胞及脂肪細(xì)胞，通過CKD模型鼠血清刺激，觀察胰島素及mTORC1信號通路變化，并采用mTO

5、RC1激活劑磷脂酸(PA)刺激，上調(diào)mTORC1，觀察胰島素信號通路變化。
　　結(jié)果：
　　1、CKD組血肌酐(93.63±8.05)、尿素氮(15.81±2.07)、尿酸(90.33±3.26)、膽固醇(2.73±0.29)，尿蛋白(45.32±11.68)明顯高于對照組血肌酐(35.10±4.07)、尿素氮(5.55±0.35)、尿酸(77.27±4.34)、膽固醇(1.56±0.07)，尿蛋白(11.17±4.06)，

6、p＜0.05;白蛋白(31.69±1.19)低于對照組白蛋白(36.57±0.55)，p＜0.05;
　　2、IPGTT顯示CKD組糖耐量明顯低于對照組，p＜0.05;HOMA-IR顯示CKD組HOMA-IR(4.45±0.73)明顯高于對照組(1.87±0.54)，p＜0.05，即CKD組胰島素敏感性明顯低于對照組;
　　3、CKD組脂肪組織、肌肉組織胰島素信號通路蛋白p-y-IRS1、p-AKT及mTORC1信號通路蛋白

7、p-mTOR、p-p70s6k明顯低于對照組，p＜0.05;肝臟p-AKT及p-mTOR未見明顯差異;
　　4、CKD組大鼠血清體外刺激肌細(xì)胞及脂肪細(xì)胞導(dǎo)致胰島素信號通路蛋白表達(dá)下降，伴隨mTORC1信號通路蛋白表達(dá)下降，通過上調(diào)mTORC1信號通路，體外肌細(xì)胞細(xì)胞胰島素抵抗有所改善，對脂肪細(xì)胞影響不大。
　　結(jié)論：
　　1、CKD大鼠IR狀態(tài)下肌肉、脂肪組織發(fā)生胰島素抵抗伴mTORC1下調(diào)。
　　2、體外CKD