慢性炎癥與胰島素抵抗在糖尿病腎損害中的作用機(jī)制初探.pdf

1、研究背景：胰島素抵抗(IR)是2型糖尿病(T2DM)致病機(jī)制的重要因素，其在糖尿病腎病(DN)發(fā)病中的作用尚不清楚。慢性炎癥與IR的發(fā)生密切相關(guān)，炎癥如何影響腎臟IR，以及炎癥和IR在DN發(fā)生過(guò)程中的作用和機(jī)制引人關(guān)注。有研究顯示DN小鼠足細(xì)胞磷酸化胰島素受體底物-1（IRS-1pSer）增加（細(xì)胞水平IR標(biāo)志）可影響其葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體(GLUT)的功能并導(dǎo)致腎小球?yàn)V過(guò)功能異常，而腎小管上皮細(xì)胞(RTEC)胰島素敏感性及其對(duì)腎臟的影響仍缺乏

2、研究。倍半萜內(nèi)酯(PTN)可通過(guò)抑制轉(zhuǎn)錄因子NF-kB達(dá)到抗炎癥作用，是否對(duì)腎臟IR產(chǎn)生作用有待研究。
　　 研究目的：在小鼠糖尿病腎病模型上研究腎小管上皮細(xì)胞是否存在IR，進(jìn)而利用PTN干預(yù)了解炎癥對(duì)其的影響。
　　 研究方法：小鼠分為三組：(1)對(duì)照：db/m小鼠腹腔注射生理鹽水(db/m+NS)，(2)db/db小鼠腹腔注射生理鹽水(db/db+NS)，(3)db/db小鼠腹腔注射PTN(db/db+PTN)。在不

3、同周齡（8，12，16周）處死留小鼠取腎臟組織分別進(jìn)行石蠟包埋及-80℃凍存。通過(guò)免疫組化和免疫印跡(WB)的方法，檢測(cè)IRS-1pSer和GLUT-4表達(dá)以確定腎臟有無(wú)IR現(xiàn)象；檢測(cè)磷酸化哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白(pmTOR)以初步了解PTN是可能的作用通路。
　　 研究結(jié)果：
　　 (1)IRS-1pSer在RTEC、系膜細(xì)胞、足細(xì)胞中均有分布。其表達(dá)量隨周齡增加變化不明顯。db/m小鼠與同周齡db/db小鼠相比，RT

4、EC中IRS-1pSer增加（免疫組化陽(yáng)染面積：8w:0.177±0.068vs0.417±0.042，12w:0.153±0.051vs0.444±0.055,16w:0.162±0.030vs0.434±0.060,p＜0.05;WB法IRS-1pSer/IRS-1相對(duì)光密度，即ODIRS-1pSer/IRS-1,分別為：8w:1±0vs0.976±0.046，12w:1.032±0.052vs1.062±0.060,16w:1.0

5、41±0.038vs1.050±0.087,p＜0.05);給予PTN干預(yù)后表達(dá)下降（免疫組化陽(yáng)染面積：12w:0.444±0.055vs0.329±0.032,16w:0.434±0.060vs0.408±0.061,p＜0.05;ODIRS-1pSer/IRS-1分別為：12w:1.062±0.060vs0.975±0.036,16w:1.050±0.087vs1.052±0.062,p＜0.05)。
　　 (2)GLUT-

6、4在腎皮質(zhì)、髓質(zhì)中均有表達(dá)，在腎髓質(zhì)中表達(dá)較均一。其表達(dá)量隨周齡增加變化不明顯。db/db小鼠與同周齡db/m小鼠相比，RTEC中GLUT-4表達(dá)下降（免疫組化陽(yáng)染面積：8w:0.122±0.022vs0.071±0.010;12w:0.107±0.016vs0.075±0.009;16w:0.114±0.013vs0.070±0.018;p＜0.05:ODGLUT-4/βaction分別為8w:1±0vs0.606±0.137,12w

7、:0.968±0.149vs0.578+0.142，16w：1.060±0.132vs0.452+0.141，p＜0.05。)；給予PTN干預(yù)后表達(dá)增加（免疫組化陽(yáng)染面積：12w:0.107±0.016vs0.075±0.009vs0.088±0.006;16w:0.114±0.013vs0.070±0.018vs0.085±0.019;p＜0.05;ODGLUT-4/βaction分別為12w:0.578±0.142vs0.638±0

8、.123,16w:0.579±0.165vs0.452±0.141,p＜0.050).
　　 (3)pmTOR在腎小管上皮細(xì)胞RTEC、系膜細(xì)胞、足細(xì)胞中均有分布;db/db小鼠與同周齡db/m小鼠相比，RTEC中pmTOR增加（免疫組化陽(yáng)染面積：8w:0.358±0.058vs0.460±0.133;12w:0.341±0.026vs0.469±0.088;16w0.391±0.037vs0.497±0.109;p＜0.05)