腫瘤抑制基因XAF1在非小細(xì)胞肺癌中表達(dá)的初步研究.pdf

1、目的：研究腫瘤抑制基因XAF1在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá),探討XAF1在非小細(xì)胞肺癌發(fā)生、發(fā)展中的作用,為尋找肺癌靶向基因治療的新靶點(diǎn)提供理論依據(jù)。
　　 方法：通過收集臨床手術(shù)切除的新鮮非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)組織(病理學(xué)檢查明確為鱗癌和腺癌)51例,按癌組織、癌旁組織(距癌組織2cm內(nèi)的非癌組織)和正常肺組織(距癌組織5cm以上)三個(gè)不同部位無菌取材,采用半定量逆轉(zhuǎn)錄.聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)檢測15例NSCLC肺癌組織

2、、癌旁組織及正常肺組織中XAF1、XIAP mRNA表達(dá)情況；應(yīng)用S-P免疫組化檢測51例肺癌患者癌組織、癌旁組織及正常肺組織中XAF1蛋白表達(dá),分析其表達(dá)和臨床病理特征相關(guān)性；利用重組腺病毒Ad5/F35-XAF1介導(dǎo)轉(zhuǎn)染人肺腺癌細(xì)胞株A549和肺鱗癌細(xì)胞株SK-MES-1,采用RT-PCR定性檢測肺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)染前、后XAF1 mRNA及蛋白表達(dá)變化,MTT及流式細(xì)胞計(jì)量法分別檢測轉(zhuǎn)染前、后肺癌細(xì)胞增殖和凋亡變化。
　　 結(jié)果：

3、(1)RT-PCR檢測的15例新鮮肺癌組織中,3例XAF1、XIAP mRNA無表達(dá),在表達(dá)的12例患者中:肺癌癌組織較癌鄰近正常肺組織XAF1 mRNA表達(dá)水平下調(diào)(P<0.05),表達(dá)強(qiáng)度由0.73±0.16下調(diào)為0.48±0.14,下調(diào)34.25％；癌旁組織較癌鄰近正常組織無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；XIAP mRNA的表達(dá)癌組織明顯高于癌鄰近正常肺組織(P<0.05),表達(dá)強(qiáng)度由0.50±0.11上調(diào)為0.72±0.14,上調(diào)

4、30.56％。(2)S-P免疫組化結(jié)果顯示:癌組織中XAF1蛋白陽性表達(dá)28例(28/51,54.9％),癌旁組織40例(40/51,78.4％),正常組織中44例(44/51,86.7％),癌組織中XAF1表達(dá)強(qiáng)度均弱于癌旁組織及正常肺組織(p<0.05),而癌旁組織與正常肺組織表達(dá)強(qiáng)度無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)。(3)XAF1在A549和SK-MES-1細(xì)胞中表達(dá)較弱或缺如,經(jīng)重組腺病毒Ad5/F35-XAF1轉(zhuǎn)染后RT-PCR檢

5、測顯示,XAF1 mRNA及蛋白表達(dá)顯著增強(qiáng),且隨劑量依賴性增強(qiáng),在SK-MES-1細(xì)胞中表達(dá)更顯著；(4)MTT法檢測轉(zhuǎn)染腺病毒XAF1肺癌細(xì)胞生長增殖受抑制,且呈有效滴度依賴性抑制增強(qiáng)；流式細(xì)胞計(jì)量法檢測不同滴度Ad5/F35-XAF1轉(zhuǎn)染后,在致死滴度范圍內(nèi)肺癌細(xì)胞凋亡隨滴度增加而逐漸增強(qiáng)。
　　 結(jié)論：①本研究結(jié)果表明,非小細(xì)胞肺癌中腫瘤抑制基因XAF1表達(dá)降低或缺如,XIAP基因在肺癌組織中表達(dá)明顯增強(qiáng),XIAP作為凋

6、亡抑制基因現(xiàn)已被肯定[1],而XAF1在肺癌發(fā)生、發(fā)展中具有促凋亡作用。②腫瘤抑制基因XAF1在NSCLC組織中的表達(dá)下調(diào)與腫瘤惡性程度、病理類型、分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān),XAF1有望成為預(yù)測肺癌預(yù)后的一個(gè)新的腫瘤標(biāo)志物。③重組腺病毒Ad5/F35-XAF1及對照腺病毒Ad5/F35-EGFP,可成功對肺癌細(xì)胞株進(jìn)行瞬時(shí)轉(zhuǎn)染,檢測肺癌細(xì)胞中XAF1 mRNA及蛋白表達(dá)較轉(zhuǎn)染前明顯增強(qiáng),可見重組腺病毒是適用于NSCLC基因治療一良好載體。④