依普拉芬防治去卵巢大鼠骨質疏松的實驗研究及其NO調控機制探討.pdf

1、目的：觀察不同劑量的人工合成的植物雌激素—依普拉芬對去卵巢大鼠骨質疏松的防治作用；體外培養(yǎng)大鼠成骨細胞，觀察依普拉芬對成骨細胞增殖和成骨分化的影響；檢測依普拉芬對體外培養(yǎng)的大鼠成骨細胞和去卵巢大鼠一氧化氮(NO)以及一氧化氮合酶(NOS)生成的影響；探討依普拉芬防治絕經后骨質疏松的作用以及NO調控機制，為其更好的在臨床應用提供理論依據。
　　 方法：(1)60只SD雌性大鼠，隨機分成六組：設一假手術組；腹腔手術切除大鼠雙側卵巢,

2、分為陰性對照組、依普拉芬低、中、高劑量組和雌激素對照組，分別給予基礎飼料和不同劑量受試物，12周后進行骨密度、骨組織形態(tài)計量、生物力學以及骨代謝指標測定，與雌激素對照，觀察給與依普拉芬對絕經后骨質疏松的防治作用。(2)體外分離、培養(yǎng)、純化新生大鼠顱蓋骨成骨細胞，堿性磷酸酶染色及礦化結節(jié)染色鑒定，將不同濃度的依普拉芬加入培養(yǎng)液，測定細胞增殖情況、堿性磷酸酶(ALP)活性及鈣化結節(jié)。與雌激素對照，了解依普拉芬對成骨細胞增殖和分化的影響。(3

3、)體外分離培養(yǎng)新生SD大鼠顱蓋骨成骨細胞，取第二代細胞，培養(yǎng)液中分別加入不同濃度的依普拉芬，72小時后，測定各組細胞培養(yǎng)基中的NO濃度，RT-PCR方法檢測各組細胞中內皮型一氧化氮合酶(eNOS)mRNA的表達。(4)按第一部分方法建立絕經后骨質疏松模型及分組，給與受試物12周后測定大鼠血清一氧化氮(NO)以及一氧化氮合酶(NOS)含量。用免疫組織化學方法檢測骨組織中eNOS以及iNOS的表達。
　　 結果：(1)大鼠去卵巢后骨

4、密度顯著下降,股骨的力學性能以及骨代謝指標有較大變化，彎曲強度和彎曲彈性模量明顯降低。給予依普拉芬后,可使骨密度顯著提高(P<0.01),存在一定的劑量-效應關系,同時彎曲強度和彎曲彈性模量明顯增加，但均低于雌激素對照組。(2)與陰性對照組相比，各濃度組的依普拉芬均可增加成骨細胞數量(P<0.01),提高成骨細胞的ALP活性和促進鈣化結節(jié)形成(P<0.01)。其中10-8～10-5mol/L作用更為顯著。(3)與陰性對照組相比，各濃度組

5、的依普拉芬均可增加成骨細胞培養(yǎng)液中的NO濃度并促進 eNOS mRNA的表達(P<0.01)。其中10-8～10-5mol/L之間作用更為顯著。(4)與假手術組相比，去卵巢大鼠陰性對照組血清NO、NOS濃度以及股骨eNOS表達均明顯降低，依普拉芬各劑量組高于陰性對照組，與假手術組差異無顯著意義。同時低于雌激素組。
　　 結論：依普拉芬對去卵巢大鼠具有顯著的骨保護效應,同時可以促進大鼠成骨細胞的增殖和成骨分化，并存在一定的劑量效應