氨基熒光探針檢測用于制作人工心臟瓣膜的牛心包交聯(lián)程度的研究.pdf

1、研究目的
　　生物材料廣泛應(yīng)用于心血管外科領(lǐng)域，如:應(yīng)用生物材料豬主動脈瓣、牛心包、牛頸靜脈等制作心臟生物瓣膜，帶瓣血管、補(bǔ)片等，應(yīng)用前都經(jīng)過交聯(lián)改性處理。交聯(lián)改性處理的關(guān)鍵步驟是使生物材料內(nèi)部蛋白質(zhì)分子的氨基或羧基末端之間發(fā)生交聯(lián)反應(yīng)，交聯(lián)反應(yīng)的程度直接決定了生物材料處理的效果，因此，交聯(lián)度檢測成為判斷組織品質(zhì)的重要檢測方法之一。目前只有間接檢測方法，且現(xiàn)行方法陳舊，不能準(zhǔn)確有效的說明交聯(lián)反應(yīng)程度，本實驗利用羧基熒光素琥珀酰亞胺

2、酯能與氨基基團(tuán)發(fā)生特異性不可逆結(jié)合，且在波長為488nm的激發(fā)光下發(fā)出綠色熒光這一特性，建立一種檢測生物瓣膜交聯(lián)效果的新技術(shù)—氨基熒光探針法，它能量化未經(jīng)交聯(lián)處理的氨基數(shù)量，從而反應(yīng)生物瓣膜交聯(lián)程度。
　　研究方法
　　以0.5％濃度戊二醛交聯(lián)的經(jīng)脫細(xì)胞處理的牛心包為研究對象，按其與戊二醛作用時間不同分組，未經(jīng)戊二醛處理的牛心包為對照組（A組），0.5％戊二醛處理組分為:10分鐘組（B組），30分鐘組（C組），6小時組（D組

3、）。各組反應(yīng)后洗脫戊二醛，將牛心包作快速冰凍切片，在避光條件下與羧基熒光素琥珀酰亞胺酯反應(yīng)2小時后于熒光顯微鏡下觀察各組熒光強(qiáng)度并拍照，用特殊的熒光分析軟件分析每張圖片的熒光強(qiáng)度，作統(tǒng)計學(xué)處理，比較各組平均熒光強(qiáng)度差異。同時對各組牛心包組織提蛋白行聚丙烯酰胺凝膠電泳，比較新方法與傳統(tǒng)方法檢測牛心包交聯(lián)程度的差異。
　　結(jié)果
　　熒光顯微鏡下可見隨交聯(lián)時間增加綠色熒光越弱，熒光強(qiáng)度對照組(A組)＞10分鐘組（B組）＞30分鐘組