納米載體輸送核酸藥物分子用于癌癥治療的研究.pdf

1、癌癥的產(chǎn)生和發(fā)展是一個(gè)非常復(fù)雜的過程，治療方法常常涉及到與腫瘤的生長(zhǎng)相關(guān)的方方面面?；诤怂崴幬锏闹委熓侄慰梢酝ㄟ^外源正常基因?qū)氚屑?xì)胞以糾正或補(bǔ)償因基因缺陷和異常，或者下調(diào)在腫瘤組織中過量表達(dá)的癌基因來達(dá)到治療癌癥的目的。然而，核酸藥物的體內(nèi)給藥依然是目前的最大挑戰(zhàn)。本論文針對(duì)腫瘤中抑癌基因的缺失、血管增生和缺氧微環(huán)境的特點(diǎn)，構(gòu)建了不同的核酸藥物給藥的納米載體和輸送系統(tǒng)，可高效將目的藥物輸送到特定的細(xì)胞內(nèi)，體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)都表現(xiàn)出顯著的

2、腫瘤治療效果。
　　 第一部分：設(shè)計(jì)合成了一種由低分子量聚乙烯亞胺(PEI)構(gòu)成的刷狀陽離子聚合物PHEMA-g-(PEI-b-PEG)作為基因治療載體，輸送表達(dá)野生型p53的質(zhì)粒DNA，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。該載體分子的主鏈為聚(2-羥乙基甲基丙烯酸甲酯)，側(cè)鏈為聚乙烯基亞胺-聚乙二醇。PHEMA-g-(PEI-b-PEG)表現(xiàn)出比支化聚乙烯亞胺（PEI25K，平均分子量25,000）低的細(xì)胞毒性，并有效和質(zhì)粒DNA形成納米顆粒。

3、PHEMA-g-(PEI-b-PEG)與質(zhì)粒DNA的復(fù)合物能更有效地被BT474細(xì)胞內(nèi)吞，轉(zhuǎn)染效率優(yōu)于PEI25K。進(jìn)一步利用PHEMA-g-(PEI-b-PEG)攜載表達(dá)野生型p53的質(zhì)粒DNA，可以成功提高BT474細(xì)胞中野生型p53的表達(dá)量，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，提高對(duì)化療藥物阿霉素的敏感程度。
　　 第二部分：構(gòu)建了環(huán)狀RGD多肽(cRGD)修飾的陽離子脂質(zhì)體-魚精蛋白-透明質(zhì)酸顆粒cRGD-LPH-NP，靶向輸送miR-296

4、的反義核酸(anti-miR-296AMO)到血管內(nèi)皮細(xì)胞，抑制血管增生。cRGD-LPH-NP特異性輸送anti-miR-296AMO到αvβ3整合素陽性的血管內(nèi)皮細(xì)胞，下調(diào)目的miRNA表達(dá)，并進(jìn)一步抑制由肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子調(diào)節(jié)的酪氨酸激酶底物(HGS)誘導(dǎo)的血管形成和內(nèi)皮細(xì)胞的遷移；基質(zhì)膠塞模型實(shí)驗(yàn)證明攜載anti-miR-296AMO的cRGD-LPH-NP在體內(nèi)顯著抑制CD31陽性內(nèi)皮細(xì)胞向Matrigel中遷移，從而抑制血管增生

5、。
　　 第三部分：利用兩種嵌段共聚物PCL29-b-PPEEA21和PCL40-b-PEG45制備了混合膠束納米顆粒(MNP)，輸送siRNA藥物，抑制腫瘤缺氧誘導(dǎo)因子HIF-Iα的表達(dá)，抑制了前列腺癌的生長(zhǎng)。復(fù)合物MNPsiHIF有效轉(zhuǎn)染前列腺癌PC3細(xì)胞，在體外模擬缺氧條件下，下調(diào)HIF-1α蛋白表達(dá)，抑制細(xì)胞增殖和遷移，并破壞血管的增生。在PC3細(xì)胞小鼠皮下腫瘤模型，通過尾靜脈注射MNPsiHIF有效抑制腫瘤生長(zhǎng)，并抑制