用于逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的納米藥物載體的研究.pdf

1、研究目的和內(nèi)容：
　　腫瘤多藥耐藥(multidrug resistance，MDR)是腫瘤化療失敗和患者死亡的一個(gè)主要原因。利用納米載體攜載化療藥物的納米技術(shù)是逆轉(zhuǎn)腫瘤MDR的一項(xiàng)探索性研究。本論文第一部分探討pH敏感普魯蘭多糖納米粒攜載阿霉素后，在逆轉(zhuǎn)乳腺癌耐藥細(xì)胞MCF-7/ADR多藥耐藥性中的作用及其相關(guān)機(jī)制。
　　近年來(lái)，氧化石墨烯作為一種藥物輸送的載體引起人們廣泛的重視。本論文第二部分探討氧化石墨烯攜載阿霉素后，

2、在逆轉(zhuǎn)乳腺癌耐藥細(xì)胞MCF-7/ADR多藥耐藥性中的作用及其相關(guān)作用機(jī)制。本論文第三部分就檢測(cè)了氧化石墨烯的遺傳毒性，并通過(guò)基因芯片技術(shù)進(jìn)一步探討其分子機(jī)制，評(píng)價(jià)將其用作藥物載體的可行性。
　　研究方法：
　　1)通過(guò)尿刊酸疏水改性合成普魯蘭多糖衍生物URPA，再通過(guò)自乳化技術(shù)制備pH敏感普魯蘭多糖URPA納米粒，高效包載阿霉素后檢測(cè)其釋藥行為。
　　2)運(yùn)用MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)載藥ADR-URPA納米粒對(duì)MCF-7和MCF

3、-7/ADR的細(xì)胞毒性作用。運(yùn)用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)MCF-7和MCF-7/ADR細(xì)胞的藥物攝取量。運(yùn)用激光共聚焦技術(shù)檢測(cè)阿霉素在兩種細(xì)胞內(nèi)的分布情況。
　　3)以氧化石墨烯作為載體，負(fù)載模擬藥物阿霉素，并檢測(cè)其釋藥行為。
　　4)運(yùn)用MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)ADR-GO對(duì)MCF-7和MCF-7/ADR的細(xì)胞毒性作用。運(yùn)用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)MCF-7和MCF-7/ADR細(xì)胞的藥物攝取量。運(yùn)用激光共聚焦技術(shù)檢測(cè)阿霉素在兩種細(xì)胞內(nèi)的分布情況。運(yùn)

4、用免疫熒光技術(shù)探討ADR-GO逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的作用機(jī)制。
　　5)采用微核實(shí)驗(yàn)檢測(cè)氧化石墨烯的遺傳毒性。通過(guò)PCR和瓊脂糖電泳檢測(cè)氧化石墨烯與基因組DNA的相互作用及其對(duì)DNA復(fù)制的影響。運(yùn)用基因芯片技術(shù)，探討氧化石墨烯產(chǎn)生遺傳毒性的分子機(jī)制。通過(guò)MTT實(shí)驗(yàn)和流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)氧化石墨烯對(duì)人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231的毒性作用及其對(duì)細(xì)胞周期的影響。
　　結(jié)果：
　　1)尿刊酸與普魯蘭多糖成功以酯鍵偶聯(lián)；ADR-UR

5、PA載藥納米粒成功制備，ADR的釋放具有顯著的pH敏感性。
　　2)與游離ADR相比，ADR-URPA納米粒增強(qiáng)了對(duì)MCF-7和MCF-7/ADR的細(xì)胞毒性作用，尤其是MCF-7/ADR細(xì)胞，IC50顯著降低。
　　3)與游離ADR相比，ADR-URPA納米粒顯著增加了MCF-7/ADR細(xì)胞對(duì)ADR的攝取量。
　　4)ADR-URPA納米粒顯著增加了ADR在MCF-7/ADR細(xì)胞內(nèi)的蓄積，且主要分布在胞核內(nèi)。
　

6、　5)ADR-GO成功制備，ADR的釋放具有顯著的pH敏感性。
　　6)與游離ADR相比，ADR-GO顯著增強(qiáng)了對(duì)MCF-7/ADR的細(xì)胞毒性作用。
　　7)與游離ADR相比，ADR-GO顯著增加了MCF-7/ADR細(xì)胞對(duì)ADR的攝取量。
　　8)ADR-GO顯著增加了ADR在MCF-7/ADR細(xì)胞內(nèi)的蓄積，且分布在胞核內(nèi)。
　　9)氧化石墨烯對(duì)小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞有誘變作用，導(dǎo)致染色體損傷和斷裂。
　　1

7、0)氧化石墨烯可以與基因組DNA發(fā)生相互作用，影響DNA的復(fù)制。
　　11)氧化石墨烯改變了細(xì)胞的基因表達(dá)譜，篩選出了差異表達(dá)的基因，涉及細(xì)胞周期、翻譯控制、DNA損傷、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞代謝等多個(gè)信號(hào)通路。
　　12)氧化石墨烯在較低濃度時(shí)對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞沒有明顯的細(xì)胞毒性作用，而在較高濃度時(shí)顯著抑制了細(xì)胞的生長(zhǎng)和存活。
　　13)氧化石墨烯在較低濃度時(shí)導(dǎo)致了S期DNA含量的減少，抑制了DNA的合成速率，而在較

8、高濃度時(shí)導(dǎo)致了G2/M期的阻滯，抑制了細(xì)胞的增殖。
　　結(jié)論：
　　1)ADR-URPA納米粒逆轉(zhuǎn)了MCF-7/ADR細(xì)胞的多藥耐藥性。逆轉(zhuǎn)機(jī)制是通過(guò)內(nèi)吞途徑攜載藥物進(jìn)入細(xì)胞，逃逸了P-gp的識(shí)別和外排作用。
　　2)ADR-GO逆轉(zhuǎn)了MCF-7/ADR細(xì)胞的多藥耐藥性。逆轉(zhuǎn)機(jī)制是通過(guò)胞吞和被動(dòng)擴(kuò)散兩種途徑攜載藥物進(jìn)入細(xì)胞，逃逸了P-gp的識(shí)別和外排作用。
　　3)氧化石墨烯具有濃度依賴性的遺傳毒性，其產(chǎn)生機(jī)制涉