基于RNA干擾技術的核酸藥物及藥物載體用于癌癥治療的研究.pdf

1、RNA干擾(RNAi)是近年來發(fā)現(xiàn)的在生物體內(nèi)普遍存在的一種生物學現(xiàn)象。在RNAi藥物開發(fā)中，一方面，需要不斷發(fā)現(xiàn)新的靶點(siRNA或miRNA)并揭示其功能和作用機制，從而指導臨床開發(fā)切實有效的RNA藥物，用于重大疾病診斷和治療，為患者帶來福音。另一方面，由于小核酸類藥物分子本身穿透細胞膜的能力極差，也不具備靶向功能，而且在生理環(huán)境中極不穩(wěn)定，因此小核酸類藥物研究的另一個重要關鍵是開發(fā)高效無毒的輸送體系。本課題針對以上兩方面開展了研

2、究，具體工作包括以下三個方面：
　　 1、研究了miRNA190在乳腺癌轉(zhuǎn)移中的作用。通過qRT-PCR分析發(fā)現(xiàn)miR-190的表達量與乳腺癌細胞的轉(zhuǎn)移能力呈負相關關系，利用WB以及雙熒光素酶報告基因分析發(fā)現(xiàn)miR-190的下游靶點是TCF4以及ROCK1基因，可以通過與其3’-UTR結(jié)合從而抑制靶基因轉(zhuǎn)錄后的表達。接著在細胞水平證實上調(diào)miR-190或下調(diào)TCF4或ROCK1可以抑制乳腺癌細胞的遷移和侵襲。此外在乳腺癌轉(zhuǎn)移動物

3、模型中，發(fā)現(xiàn)高表達miR-190可以大大減少肺轉(zhuǎn)移的發(fā)生概率，并抑制乳腺癌的肺轉(zhuǎn)移。
　　 2、成功制備了聚乙烯亞胺(PEI)包被的金納米顆粒用于siRNA輸送。PEI同時作為還原劑和穩(wěn)定劑，通過靜電作用以合適的質(zhì)量比結(jié)合siRNA，使得納米顆粒分散良好，有均一的大小和結(jié)構(gòu)。在結(jié)合siRNA后，用激光共聚焦和流式細胞術檢測發(fā)現(xiàn)PEI修飾的金納米顆粒可以將siRNA帶入細胞，實現(xiàn)沉默MDA-MB-435s細胞中綠色熒光蛋白的表達。

4、我們接著用PEI修飾的金納米顆粒攜載PLK1-siRNA作用于內(nèi)源性細胞周期激酶PLK1，顯著抑制了基因表達并誘導更多的細胞凋亡。細胞毒性MTT實驗發(fā)現(xiàn)PEI修飾的金納米顆粒沒有表現(xiàn)出明顯的細胞毒性。
　　 3、以異辛酸亞錫為催化劑，聚己內(nèi)酯作為大分子引發(fā)劑，通過開環(huán)聚合，成功制備了一系列兩親性羥基官能化聚磷酸酯與聚己內(nèi)酯的嵌段聚合物(PCL-b-PHEP)。利用核磁共振，凝膠滲透色譜、紅外色譜等對嵌段共聚物的結(jié)構(gòu)進行了表征。這