核酸適體用于腫瘤細胞的檢測與富集研究.pdf

1、探索腫瘤細胞檢測新方法對于實現(xiàn)癌癥的早期診斷和預防具有極其重要的意義。傳統(tǒng)的腫瘤細胞檢測方法主要依靠形態(tài)學特征進行判定,存在敏感性低,易產(chǎn)生假陽性信號等局限性。核酸適體作為一類新型分子探針,既可作為識別探針實現(xiàn)對靶腫瘤細胞的特異性結合,亦可利用其酶催化活性構建信號探針,且由于其親和力高、特異性好、易篩選、易修飾、易儲存等優(yōu)點,在腫瘤細胞的檢測和富集中有著廣泛的應用前景。本文以人急性淋巴白血病CCRF-CEM細胞及人宮頸癌Hela細胞為檢

2、測對象,將核酸適體探針應用于腫瘤細胞檢測和富集中,發(fā)展了對腫瘤細胞檢測和富集的新方法。具體如下:
　　 1.基于核酸適體G四聚體-葉酸復合物的腫瘤細胞檢測研究選擇具有酶催化作用的核酸適體G四聚體-Hemin復合體作為信號發(fā)生單元,通過氨基-羧基交聯(lián)將G四聚體與對葉酸受體高表達腫瘤細胞具有靶向識別作用的葉酸分子共價連接,制備了G四聚體-葉酸復合物。結合G四聚體-Hemin復合體在雙氧水存在的情況下能催化ABTS氧化顯色作用和葉酸分

3、子對表達葉酸受體的腫瘤細胞的靶向識別功能,通過酶標儀檢測酶催化產(chǎn)物在414nm處的吸收值,實現(xiàn)了對葉酸受體高表達的Hela細胞的特異性定量檢測,檢測限達到了每毫升103個細胞,有望成為一種廣譜性檢測葉酸受體高表達腫瘤細胞的方法。
　　 2.基于核酸適體和信號DNA功能化金納米顆粒的腫瘤細胞檢測研究選擇對CCRF-CEM細胞具有靶向識別作用的核酸適體sgc8c作為識別單元,利用信號DNA分子作為信號發(fā)生單元,結合高比表面積的金納米

4、顆粒作為載體以提高核酸探針修飾豐度,開展了基于核酸適體和信號DNA功能化金納米顆粒的腫瘤細胞檢測研究。在該研究中,首先通過巰基將sgc8c交聯(lián)到金納米顆粒上,再將信號DNA雜交在sgc8c的延伸序列上,成功制備了基于核酸適體和信號DNA功能化金納米顆粒的腫瘤細胞檢測探針,在靶向識別結合目標細胞后釋放出信號DNA,再利用分子信標對信號DNA進行檢測,實現(xiàn)了對CEM細胞的特異性檢測。在沒有結合信號DNA擴增檢測技術的情況下,每毫升104個目

5、標細胞即可產(chǎn)生明顯的檢測信號。
　　 3.基于核酸適體靶向識別功能的腫瘤細胞磁分離和富集研究選擇對CCRF-CEM細胞具有靶向識別作用的核酸適體sgc8c為識別單元,通過采用生物素-鏈霉親和素交聯(lián)方法,將sgc8c修飾在磁性微米磁球上,成功制備了能特異性結合CEM細胞的核酸適體功能化磁珠。該功能化磁珠在對目標細胞的捕獲后,利用簡單的磁分離手段即可實現(xiàn)對目標細胞的特異性分離和富集,捕獲檢測限達到了每毫升102個細胞,分離純度超過了