基于核酸適體的微流控芯片腫瘤細胞富集與檢測平臺的建立.pdf

1、本論文主要是針對急性早幼粒細胞白血病腫瘤細胞建立微流控芯片富集和分子生物學檢測技術平臺。整本論文主要可分為兩個部分。其中第一部分主要針對急性早幼粒細胞白血病的腫瘤標志物建立實時熒光PCR分子生物學檢測體系。第二部分主要針對急性早幼粒細胞白血病腫瘤細胞建立基于核酸適體的微流控芯片富集與檢測平臺。
　　第一章為緒論，通過閱讀大量的文獻和資料，綜述了本論文開展的研究中所涉及的主要領域。包括:白血病的介紹和其檢測技術的發(fā)展、富集和檢測循環(huán)

2、腫瘤細胞的主要技術、核酸適體的簡要介紹及其發(fā)展應用。
　　第二章主要針對急性早幼粒細胞白血病的腫瘤標志物建立實時熒光PCR分子生物學檢測體系。在本章中主要針對普遍存在于此類白血病細胞系中的PML-RARA融合基因建立實時PCR檢測體系。首先用構建的PML-RARA融合基因L型融合形式的陽性質粒篩選出了最優(yōu)的引物和探針組合，然后通過優(yōu)化實時PCR體系的各種成分確定了最優(yōu)的實時PCR體系。最后用陽性質粒、NB4細胞系cDNA（含有PM

3、L-RARA融合基因）及U266細胞系cDNA（陰性對照）作為模板，比較了普通引物（不加尾）和加尾引物體系的靈敏度和特異性，最終確定了最優(yōu)的實時PCR檢測體系。結果表明實驗中建立的最優(yōu)實時PCR體系不僅具有很高的靈敏度（可達到10拷貝），而且具有良好的特異性。
　　第三章主要針對急性早幼粒細胞白血病腫瘤細胞建立基于核酸適體的微流控芯片富集平臺，并用實時PCR技術對富集細胞進行檢測。在本章中，首先用流式細胞術和芯片上的細胞捕獲效果篩

4、選出了一條與NB4細胞系具有高親和力和良好特異性的核酸適體。然后根據實驗室現(xiàn)有條件優(yōu)化了細胞捕獲實驗中的幾個參數(shù)，使細胞捕獲效率得到顯著提高。最后對人工制備的細胞混合樣品（摻雜不同數(shù)量的NB4細胞和對照U266細胞）進行捕獲，并將細胞從芯片通道中釋放下來進行核酸水平的檢測。結果表明，本實驗中建立的微流控芯片平臺對NB4細胞的捕獲效率可達到80％左右。在DNA水平的檢測中，含有101個NB4細胞的樣品在實時PCR中可產生較強信號，表明本實