蛋白藥物用于藥物涂層支架的研究.pdf

1、以死亡率計(jì)，冠狀動(dòng)脈粥樣硬化為代表的心血管疾病至今仍是人類健康的第一殺手。在冠狀動(dòng)脈腔內(nèi)植入支架是對(duì)于該類疾病進(jìn)行非手術(shù)治療的主要手段，而將藥物載于支架在病變部位緩慢釋放則是避免支架植入后血管再狹窄的必要措施。目前臨床上用于藥物涂層支架的多為化學(xué)小分子藥物，其在抑制平滑肌增殖的同時(shí)，也抑制內(nèi)皮細(xì)胞的生長(zhǎng)，造成再內(nèi)皮化大幅度延遲，以及急性或亞急性血栓等問(wèn)題，使得藥物涂層支架的應(yīng)用存在著潛在的危險(xiǎn)。蛋白藥物因其生物特異性，有可能選擇性地抑制

2、平滑肌或促長(zhǎng)血管內(nèi)皮，引起了科學(xué)家的關(guān)注和研究投入，報(bào)道了一些有前景的蛋白藥物，為藥物涂層支架的研究提出了一些新的思路，顯示了這一領(lǐng)域的技術(shù)可行性。但對(duì)于持有脆弱三級(jí)結(jié)構(gòu)的蛋白藥物來(lái)說(shuō)，將蛋白大分子藥物固定化在支架表面并且緩慢地釋放于治療部位在技術(shù)上具有一定的難度和挑戰(zhàn)。 本研究提供了一個(gè)可以安全有效地將足夠劑量的蛋白藥物均勻地組合于高分子涂層的基質(zhì)中的方法，即將我們自行開發(fā)的新型材料體系：穩(wěn)定的水相-水相乳液技術(shù)及其基礎(chǔ)上制備

3、的蛋白質(zhì)-多糖玻璃體應(yīng)用于支架涂層上，在有效保護(hù)蛋白活性的同時(shí)實(shí)現(xiàn)蛋白的緩控釋，著眼于從制劑工藝的角度解決再狹窄問(wèn)題。 本研究是以牛血清白蛋白為模型，通過(guò)穩(wěn)定的水相-水相乳液技術(shù)將其制備成多糖玻璃體顆粒，并將多糖玻璃體顆粒分散于聚乳酸的二氯甲烷和乙酸乙酯（1:1）溶液中，噴涂于316L不銹鋼支架表面制成蛋白涂層支架，用SEC-HPLC比較了蛋白涂層支架制備前后蛋白的聚集情況，并用掃描電鏡等對(duì)蛋白涂層支架表面進(jìn)行了表征。將制備的蛋

4、白涂層支架在水浴搖床以37°C 磷酸鹽緩沖液（PBS）為介質(zhì)進(jìn)行體外釋放動(dòng)力學(xué)研究，按規(guī)定的時(shí)間間隔取樣后用MicroBCA試劑盒測(cè)定，并考察了控釋層厚度，高分子涂層（PLA、PLGA），蛋白葡聚糖比例，蛋白種類等因素對(duì)蛋白體外釋放的影響。 在對(duì)蛋白涂層支架條件有所把握的基礎(chǔ)上，本文考察了將具有促血管生成作用的促紅細(xì)胞生成素（EPO）應(yīng)用于心臟涂層支架的可行性，建立了EPO效價(jià)檢測(cè)方法，比較了EPO涂層前后蛋白聚集情況，并采用效

5、價(jià)檢測(cè)方法測(cè)定了EPO體外釋放動(dòng)力學(xué)。 結(jié)果表明蛋白涂層支架在電鏡觀察下外觀圓整，表面光滑，制劑過(guò)程中未產(chǎn)生蛋白聚集，且蛋白擔(dān)載量高，能從涂層中緩慢釋放達(dá)50天以上。蛋白釋放速度隨著控釋層的厚度增加而減慢。PLGA涂層的釋放速度明顯較PLA涂層快。制備多糖玻璃體顆粒時(shí)葡聚糖/蛋白的比例越高，蛋白釋放的突釋越小。以該法制備的蛋白涂層支架，蛋白的性質(zhì)不同對(duì)釋放行為影響不大。EPO涂層支架亦能保護(hù)EPO在涂層和釋放過(guò)程中的活性，且實(shí)現(xiàn)